教育裝備采購網(wǎng)訊：鷹不撲又名鳥不企、老鴉怕等,為五加科植物黃毛楤木的干燥根,主產(chǎn)于廣西、廣東和湖南等地,具有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、散瘀消腫之功效,用于治療跌打損傷、風(fēng)濕性腰腿痛、急慢性肝炎、腎炎水腫、淋巴結(jié)腫大、咽喉炎、蛇咬傷及糖尿病等癥[1]。鷹不撲主要含以齊墩果酸為主的三萜皂苷[2]。齊墩果酸是主要有效成分,原標準(收載于《廣西中藥材標準》1990年版)未有含量測定項,文獻報道僅為薄層掃描法[3]對齊墩果酸進行定量分析。本試驗首次采用HPLC法對鷹不撲中齊墩果酸進行含量測定,為藥材使用和質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。
1儀器與試藥
LC-10AT日本島津高效液相色譜儀(帶紫外可見檢測器),日本島津UV-2001紫外分光光度計,威瑪龍化學(xué)工作站。
齊墩果酸對照品(批號110709-200304,含量測定用)由中國藥品生物制品檢定所提供;鷹不撲由廣西玉林制藥有限責(zé)任公司提供,經(jīng)廣西玉林制藥有限責(zé)任公司中藥鑒定室鑒定為五加科植物黃毛楤木AraliadecaisneanaHance的干燥根。水為重蒸餾水,甲醇為色譜純,其余試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件
Lichrospher-C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),流動相為甲醇-0.2%磷酸溶液(85∶15)[4];流速：1.0mL/min;檢測波長：210nm;柱溫：30℃;進樣量：10μL。理論板數(shù)按齊墩果酸計算應(yīng)不低于3000(色譜圖見圖1)。
2.2對照品溶液的制備
精密稱取齊墩果酸對照品適量,加甲醇制成每1mL含齊墩果酸59μg的溶液,作為對照品溶液。
2.3供試品溶液的制備
取鷹不撲粉末約0.5g,精密稱定,置平底燒瓶中,精密加入甲醇-15%鹽酸(4∶1)50mL,稱定重量,水浴加熱回流5h,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,作為供試品溶液。
2.4線性關(guān)系的考察
分別精密吸取齊墩果酸對照品溶液(59.0μg/mL)1、2、4、6、8、10mL,置于10mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,各進樣10μL,連續(xù)進樣2次,測定峰面積。以對照品進樣量(C)為橫坐標,峰面積(A)為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程：A=2.6186×105C-473.5,r=0.9998(n=6),結(jié)果表明,齊墩果酸在0.059～0.59μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.5精密度試驗
取齊墩果酸對照品溶液,各重復(fù)進樣6次,測定峰面積,結(jié)果齊墩果酸峰面積平均值為157847,RSD=0.58%(n=6)。
2.6重現(xiàn)性試驗
取同一批號樣品6份,按“2.3”項下方法制備供試品溶液,測定,結(jié)果齊墩果酸峰面積平均值為120822,RSD=1.09%(n=6)。表明該法重現(xiàn)性良好。
2.7穩(wěn)定性試驗
取同一供試品溶液,分別于配制后0、4、8、12、24h依法測定峰面積,結(jié)果齊墩果酸RSD=1.25%,表明樣品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.8加樣回收率試驗
取已知齊墩果酸含量的鷹不撲粉末約0.2g,精密稱定,平行稱取6份,各加入一定量的齊墩果酸對照品,按“2.3”項下方法制備供試液,按上述色譜條件測定。結(jié)果齊墩果酸平均加樣回收率為95.4%,RSD=0.67%,說明該方法準確可靠。見表1。表1齊墩果酸加樣回收率試驗結(jié)果(略)
2.9樣品測定
取鷹不撲樣品,按“2.3”項下方法操作,在上述色譜條件下進行測定,結(jié)果見表2。表2樣品含量測定結(jié)果(略)
3討論
齊墩果酸標準品在紫外分光光度計190～500nm波長范圍進行光譜掃描,其最大吸收波長為203nm,但由于流動相在短波長處有末端吸收,為了減少干擾,提高信噪比,采取不同波長的色譜圖進行比較。選擇210nm為檢測波長,檢測器響應(yīng)值大,基線平穩(wěn),峰形好。
本試驗考察不同的酸(硫酸、鹽酸、醋酸)及酸度(5%、15%、30%)回流提取,其中15%鹽酸甲醇液直接回流提取的水解效果最好,比一般水解過程(先甲醇提取再水解)簡單,重現(xiàn)性好。首次采用HPLC法對鷹不撲中齊墩果酸進行含量測定,精密度優(yōu)于薄層掃描法,無需顯色,結(jié)果穩(wěn)定,方法簡便。為用HPLC法測定鷹不撲中齊墩果酸含量,提供了一種可借鑒的方法。
鷹不撲的傳統(tǒng)藥用部位為根,本試驗考察廣西不同地區(qū)的鷹不撲,齊墩果酸的含量相差不大,根與莖的含量也相差不大,可以用其莖作為藥用部位,擴大藥用范圍。（謝沂楠/編輯）
相關(guān)產(chǎn)品:
高效液相色譜儀EX1600
