教育裝備采購網(wǎng)：氣相色譜可分為氣固色譜和氣液色譜。氣固色譜指流動相是氣體，固定相是固體物質(zhì)的色譜分離方法。例如活性炭、硅膠等作固定相。氣液色譜指流動相是氣體，固定相是液體的色譜分離方法。例如在惰性材料硅藻土涂上一層角鯊?fù)?，可以分離、測定純乙烯中的微量甲烷、乙炔、丙烯、丙烷等雜質(zhì)。
辛夷，又名紫玉蘭、望春花，屬木蘭科木蘭屬落葉喬木[1]，其花蕾入藥稱辛夷。有散風(fēng)寒、通鼻竅之功效[2]。辛夷揮發(fā)油是一種重要的天然香料，廣泛用于醫(yī)藥、日化和香精香料等行業(yè)[3]。辛夷揮發(fā)油的測定及化學(xué)成分的質(zhì)譜分析已有報道，提取方法有水蒸氣蒸餾法[4]、浸膏法[5]、超臨界CO2流萃取法[6]等，以上方法提取辛夷中揮發(fā)油時，樣品的破碎對桉油精的回收率有很大的影響[4]。桉油精是辛夷揮發(fā)油的重要組成部分，國內(nèi)對辛夷藥材桉油精含量測定的相關(guān)報道很少，2005版《中國藥典》Ⅰ部附錄ⅩC給出的桉油精含量測定法使用PEG20M+OV-17混裝氣相色譜填充柱，適用于成分不太復(fù)雜的藥材和中成藥中桉油精含量測定。辛夷藥材揮發(fā)油的成分復(fù)雜，《中國藥典》的方法不能使與桉油精相鄰的峰分離。因此，本實驗選用FFAP毛細(xì)管柱建立了辛夷藥材中桉油精含量的氣相色譜內(nèi)標(biāo)測定方法，采用勻漿破碎回流提取有效地防止了辛夷藥材中桉油精的揮發(fā)，確保了測定結(jié)果的真實性和準(zhǔn)確性。
1儀器和材料
島津GC-16A氣相色譜儀、FID檢測器、SePu3000色譜工作站;勻漿機(jī)(Thevirtiscompany.Newyork)，F(xiàn)FAP毛細(xì)管色譜柱。
辛夷藥材由貴陽中醫(yī)學(xué)院提供和鑒定，分別采自河南、廣西和貴州。
化學(xué)對照品桉油精(0788-9202、供含量測定用、中國藥品生物制品檢定所);苯乙烯(化學(xué)試劑、純度大于99%、無干擾測定峰)。其它試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1對照品溶液的配制準(zhǔn)確稱取對照品桉油精適量，用甲醇溶解后置于10ml容量瓶中，配制成20mg/ml的儲備液，精密取出0.050ml儲備液于5.0ml的0.25mg/ml的苯乙烯-三氯甲烷內(nèi)表液中，加水1ml，振搖提取0.5min，離心，下層有機(jī)相為對照品溶液。
2.2樣品溶液的配制取辛夷藥材10g，精密稱量于勻漿罐中，加水150ml，勻漿，漿液及洗滌勻漿罐的水一并轉(zhuǎn)移到250ml蒸餾瓶中，加入環(huán)己烷5.0ml，于揮發(fā)油提取器[7]中回流提取4h，有機(jī)相收集于離心試管中，離心、將上清有機(jī)相轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中，分別用2.5，2ml環(huán)己烷洗用過的提取器收集管和離心試管，離心、將上層有機(jī)相一并轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中用環(huán)己烷定容為待測溶液，精密吸取待測溶液0.25ml，內(nèi)標(biāo)溶液5.00ml，于10ml具塞離心試管中，加水1.0ml，振搖提取0.5min，離心，下層有機(jī)相為供試品溶液。
2.3色譜條件用FFAP毛細(xì)管色譜柱(30mm×0.32mm，0.32μm);氮氣(N2)為載氣、柱前壓80kPa;汽化室溫度240℃;檢測器溫度240℃;柱溫：80℃保留6min，以40℃/min的速率升到220℃，保留2min;以苯乙烯為內(nèi)標(biāo)在火焰離子化檢測器(FID)上測定桉油精含量。
根據(jù)對照品的保留時間定性，峰面積比計算桉油精的含量。
2.4色譜柱和內(nèi)標(biāo)物的選擇分別用SE-30，SE-54，OV-1701和大口徑、小口徑的FFAP毛細(xì)管柱進(jìn)行對照品和樣品的測定。結(jié)果表明，桉油精在大口徑、小口徑的FFAP毛細(xì)管柱的峰形都很好，但樣品經(jīng)大口徑的FFAP毛細(xì)管柱分離，有一小峰不能與內(nèi)標(biāo)物分開。經(jīng)各種內(nèi)標(biāo)物醋酸乙酯、冰片、萘和苯乙烯比較表明，苯乙烯能與其它峰完全分開且在恰當(dāng)時間出峰。因此，選擇苯乙烯為內(nèi)標(biāo)，色譜柱為小口徑的FFAP毛細(xì)管柱。
2.5前處理方法的選擇經(jīng)不同前處理方法比較桉油精的揮發(fā)損失試驗，結(jié)果表明：辛夷藥材在40～45℃烘干4h，其中的桉油精揮發(fā)損失約30%;將辛夷藥材在套環(huán)式撞擊制樣機(jī)中粉碎，撞擊使樣品破碎而同時發(fā)熱，桉油精揮發(fā)損失30%以上;破碎的樣品于燒杯中室溫下敞開放置5d桉油精全部揮發(fā)。因此，本實驗采用加水勻漿破碎，回流提取分析辛夷藥材中的桉油精含量，有效地防止了辛夷藥材中桉油精的揮發(fā)，測定結(jié)果比干法粉碎的結(jié)果要高。
2.6提取時間的選擇取辛夷藥材10g，精密稱量于勻漿罐中，加水150ml，勻漿，漿液及洗滌勻漿罐的水一并轉(zhuǎn)移到250ml蒸餾瓶中，加入環(huán)己烷5.0ml，于揮發(fā)油提取器中回流提取，考察提取時間與提取率。
從表1可知，采用勻漿破碎后，回流提取≤4h時，隨蒸餾時間的增長，出油率增高，蒸餾時間>4h后，延長蒸餾時間，出油率變化不大，且可能影響按油精的質(zhì)量。因此，辛夷藥材的最佳蒸餾時間為4h。
2.7線性關(guān)系考察配制桉油精標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，桉油精加入量分別為0.4，0.8，1.2，1.6，2.0，2.5，3.0mg，加水1.0ml，內(nèi)標(biāo)液5.00ml，振搖提取0.5min，離心，吸取下層2.0μl，注入氣相色譜儀測定，以相對峰面積A’/對加入桉油精m(mg)進(jìn)行線性回歸，在0.4～3.0mg范圍內(nèi)，線性方程為A’=0.6622m+0.0149(r=0.9997)。
2.8精密度試驗與重現(xiàn)性實驗取對照品溶液2.0μl，按色譜條件進(jìn)行測定，連續(xù)進(jìn)樣5次，求出桉油精的相對峰面積，RSD為0.22%。
取同一個批號辛夷藥材制成的供試品溶液5份各2.0μl，按色譜條件進(jìn)行測定，連續(xù)進(jìn)樣5次，求出桉油精的相對峰面積，RSD為1.12%。
2.9回收率實驗精密稱取辛夷藥材5g，共計9份，分別加入桉油精24.00，30.00，36.00mg，制備成供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。
2.10樣品測定按本實驗建立的方法測定了河南、廣西和貴州不同產(chǎn)地的辛夷藥材，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的藥材中桉油精的含量差異很大。
3結(jié)論
本實驗建立的加水均漿制樣有效地防止了辛夷藥材中桉油精的揮發(fā)，確保了測定結(jié)果的可靠性。
通過對十余批辛夷藥材中桉油精的測定，表明本法具有良好的精密度和準(zhǔn)確性，可用于辛夷藥材的質(zhì)量控制。
(謝沂楠/編輯)
