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第八屆圖書館論壇 校體購2

RNA干擾實驗新方法適于精確高通量分析

教育裝備采購網(wǎng) 2011-09-22 15:43 圍觀205次

  教育裝備采購網(wǎng)訊:近日,謝曉亮研究組再次發(fā)表文章,提出了利用其研究組自身研發(fā)的技術(shù)——受激拉曼散射利用其研究組自身研發(fā)的技術(shù)——受激拉曼散射(stimulatedRamanscattering,SRS)顯微技術(shù)進(jìn)行RNA干擾實驗的新方法。

  這種新方法利用無需熒光標(biāo)記的受激拉曼散射顯微儀進(jìn)行定量成像,克服了生化分析方法繁瑣的色譜分析等問題,以及CARS顯微方法背景信號高,結(jié)果不精確等問題,是一種簡單精確,適用于高通量分析的新技術(shù)。在這篇文章中,研究人員就利用這種方法篩選發(fā)現(xiàn)了8個在脂肪儲存調(diào)控方面的新調(diào)控因子。

  肥胖是現(xiàn)代社會的一大病癥,會引起各種慢性疾病,比如II型糖尿病,心血管疾病等等。為了更好的了解肥胖,及其相關(guān)的代謝失序問題,我們需要深入分析脂肪在細(xì)胞水平和組織水平堆積的調(diào)控機制,目前已經(jīng)進(jìn)行了一些模式生物的脂肪儲存調(diào)控因子的全基因組分析,但是這些還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。

  一般線蟲脂肪儲存調(diào)控因子分析方法主要包括傳統(tǒng)的生物化學(xué)分析方法,比如進(jìn)行線蟲的固定染色,熒光成像等,近期一些研究組報道了利用CARS顯微技術(shù)來分析。但是這兩種方法都存在一些局限性,生化分析方法需要從線蟲中提取脂肪,進(jìn)行繁瑣的色譜分析工作,這在基因組水平上是不可能完成,而且使用到的一些有機溶劑也會干擾實驗分析。而利用CARS顯微技術(shù)進(jìn)行分析又存在背景信號高,靈敏度受限等問題。

  這篇文章應(yīng)用的SRS顯微技術(shù)能通過對激光迅速反應(yīng),精確調(diào)制來去除背景噪音,從而不僅能夠得到與傳統(tǒng)拉曼光譜一樣的譜圖,而且信號強度高了幾個數(shù)量級。利用這種方法和RNAi篩選相結(jié)合,研究人員就能在生理條件下尋找脂肪儲存調(diào)控基因了。經(jīng)過實驗分析,研究人員從272個基因中找到了9個關(guān)鍵調(diào)控因子。

  將SRS顯微技術(shù)與RNAi技術(shù)結(jié)合起來,能幫助研究人員在線蟲的活性生理條件下觀察脂肪代謝調(diào)控,而且這種方法無需標(biāo)記,極大的簡化了樣品準(zhǔn)備過程,適用于模式生物的細(xì)胞追蹤,也有利于高通量篩選分析。

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