大鼠葡萄糖依賴性促胰島素激素EIA試劑盒使用說明
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ELISA法。用抗大鼠GIP單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 GIP與單抗結(jié)合，加入酶標抗體，形成免疫復合物連接在板上，加入酶底物TMB，出現(xiàn)藍色，加終止液硫酸，顏色變黃，在450nm處測OD值，GIP濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中GIP濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
| 酶標板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate） | 6ml |
| 標準品（Standards）：6瓶 | 一套 | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
| 封板紙 | 一張 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
| 坐標紙 | 一張 | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
準備試劑與收集血樣
1. 收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融。
2. 標準品第一次使用時用0.5ml的標本稀釋液溶解，放置半小時混勻后使用，用后放在-20oC保存。溶解后濃度分別為14、8、3.2、1.6、0.8、0 ng/ml。
3. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測程序
1. 建立標準曲線：設(shè)標準孔6孔，每孔各加入標準品50ul。
2. 加樣：待測品孔每孔各加入待測樣品50ul。
3. 每孔加酶標抗體工作液50ul。將反應板置37℃120分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘。
6. 每孔加入100ul終止液混勻。
7. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。
結(jié)果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品14、8、3.2、1.6、0.8、0ng/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應GIP含量。
試劑盒性能
1. 靈敏度：最小的GIP 檢測濃度小于0.4ng/ml。
2. 特異性：可同時檢測重組或天然的大鼠GIP。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10％。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。
2. 洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。
3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！
