Mia Summers、Kenneth Berthelette和Kenneth J. Fountain
目標(biāo)
證明在應(yīng)對(duì)分離挑戰(zhàn)時(shí)，XP 2.5 µm色譜柱相較于傳統(tǒng)HPLC粒徑色譜柱具有更好的分離性能。
背景
將方法轉(zhuǎn)移至較小粒徑上可以縮短分析時(shí)間已成為共識(shí)。其實(shí)，這樣做還可以改善分離度。但是，隨著粒徑變小，柱壓將會(huì)增加。使用亞2µm色譜柱可能需要用到UPLC®系統(tǒng)，但HPLC用戶通過(guò)將HPLC方法轉(zhuǎn)移至eXtended Performance (XP)2.5 µm色譜柱上，同樣可獲得分離度方面的顯著改善。這對(duì)于復(fù)雜混合物的分離尤其有利，可以利用小粒徑色譜柱帶來(lái)的高分離度來(lái)鑒別雜質(zhì)或目標(biāo)化合物，而無(wú)需借助增加柱長(zhǎng)和運(yùn)行時(shí)間來(lái)實(shí)現(xiàn)。
利用etended erformance(XP)色譜柱提高相關(guān)化合物的分離度。
以阿巴卡韋有關(guān)物質(zhì)的混合物為例，證實(shí)使用XP 2.5 µm色譜柱可改善分離度。阿巴卡韋是一種核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，被用于抗HIV的治療。阿巴卡韋有關(guān)物質(zhì)的混合物包含5種化合物，其中主要成分為阿巴卡韋，此處為其戊二酸鹽(圖1)。阿巴卡韋與其反式異構(gòu)體的分離非常困難。本例通過(guò)對(duì)比3.5 µm色譜柱與高效XP 2.5 µm色譜柱，證實(shí)后者使阿巴卡韋與其有關(guān)物質(zhì)的分離獲得了全面改善。
解決方案
為了徹底分離有關(guān)物質(zhì)同時(shí)避免大量的HPLC方法開發(fā)，應(yīng)當(dāng)選擇具有更高分離能力的高效色譜柱。XP色譜柱采用2.5 µm顆粒、在超高效色譜硬件中于高壓下完成填裝，其背壓范圍也適用于在HPLC系統(tǒng)上使用。
為了證明使用XP色譜柱可提高分離性能，我們使用100 mm 3.5 µm, XSelect® CSH™ C18色譜柱對(duì)阿巴卡韋有關(guān)物質(zhì)的混合物進(jìn)行測(cè)試。在同種化學(xué)性質(zhì)及尺寸的XP 2.5 µm色譜柱上運(yùn)行同樣的方法。分離效果對(duì)比如圖2所示。
此例中，僅將3.5 µm色譜柱更換為XP 2.5 µm色譜柱，即可顯著提高分離性能。最終，總體峰容量提高31%，峰高增加高達(dá)42%。28%的分離度提高表明采用小粒徑色譜柱可改善難以分離的阿巴卡韋和反式阿巴卡韋之間的分離度。本實(shí)例說(shuō)明XP色譜柱可提高靈敏度和分離度，使目標(biāo)化合物如雜質(zhì)的鑒別和定量更加準(zhǔn)確。
總結(jié)
將HPLC方法轉(zhuǎn)移至XP 2.5 µm色譜柱，可實(shí)現(xiàn)分離度和靈敏度的提高。通過(guò)對(duì)阿巴卡韋有關(guān)物質(zhì)的分析，將3.5 µm色譜柱轉(zhuǎn)換為XP 2.5 µm色譜柱后，峰容量總體提高了31%，峰高增加高達(dá)42%，分離度提高29%。使用XP色譜柱能夠幫助HPLC用戶最大化HPLC系統(tǒng)的分離性能，減少進(jìn)一步方法開發(fā)的需求，從而提升成本效益和資產(chǎn)利用率。
