雞蛋營養(yǎng)豐富，含有蛋白質(zhì)、脂肪、膽固醇、卵磷脂、維生素、鐵、鈣、鉀等人體需要的礦物質(zhì)。然而有研究人員提出，雞蛋膽固醇含量相對較高，過多攝入雞蛋會導(dǎo)致人體血清膽固醇增高，引發(fā)心血管疾病。由此我們對雞蛋中膽固醇含量進行研究，探索快速檢測雞蛋中膽固醇含量的方法。
2. 實驗部分
2.1 儀器與試劑
儀器： HanonLC7000四元低壓高效液相色譜系統(tǒng)(配置高壓泵，紫外檢測器)，萬分之一電子天平，渦旋混合儀，離心機，超聲波清洗器
試劑： 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品，甲醇(色譜純)，異丙醇(分析純)，乙醚(分析純)，石油醚(分析純)，無水乙醇(分析純)，市售普通雞蛋
2.2 色譜條件
色譜柱：C18色譜柱 150mm×4.6mm×5μm;流動相：甲醇-異丙醇(4:1，v/v);流速：1.0mL/min;溫度：25℃; 進樣量：20μL;檢測波長：205nm。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
準(zhǔn)確稱取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品25mg，于25ml容量瓶中，用無水乙醇溶解稀釋至刻度，得膽固醇儲備液(1.0g/L)。
取膽固醇儲備液0.0，0.5， 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，1.0ml于10ml容量瓶中，無水乙醇稀釋定容，的濃度為0，0.05 ，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0g/L 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2.4 樣品前處理
取 雞蛋稱重，除去蛋清，準(zhǔn)確稱取蛋黃重量。取蛋黃樣品2.0g，用20ml高純水溶解稀釋混勻，得蛋黃稀釋液(0.1g/ml)。取蛋黃稀釋液1.0ml于 具塞離心管中，加無水乙醇1.0ml，渦旋混勻，加乙醚3.0ml，石油醚3.0ml，渦旋混合，將混合液離心(4000r/min)，使液體分層，取上 層有機相;下層再加入2.0ml乙醚和2.0ml石油醚進行萃取，合并上層萃取液，氮吹儀吹干(溫度<30℃)，0.5ml乙醇溶解，經(jīng) 0.45μm有機微孔濾膜過濾后，上機檢測。
3. 結(jié)果與討論
3.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線
配制好的系列膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，在設(shè)定好的色譜條件下進行色譜分析，進樣量為20μL，保留時間為6.72min，每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進樣三次，以峰高H(mAU)為縱坐標(biāo)，膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度C(g/L)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，線性回歸方程為H=76.45C-0.052，相關(guān)系數(shù)r=0.9991。
3.2 蛋黃中膽固醇含量
將處理好的蛋黃樣品取樣測試，進樣量20μL，在6.72min膽固醇被洗脫出來，蛋黃其他組分能與膽固醇有效分離，不干擾膽固醇的測定。由膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算膽固醇含量。(液相圖譜件見圖1，結(jié)果見表1)
圖1 蛋黃膽固醇液相圖譜
表1 蛋黃膽固醇含量
|
樣品編號 |
雞蛋重量g |
蛋黃重量g |
膽固醇含量（mg/g蛋黃） |
膽固醇含量（mg/個蛋黃） |
|
1 |
60.23 |
15.76 |
12.11 |
190.85 |
|
2 |
58.46 |
14.98 |
11.34 |
169.87 |
|
3 |
59.47 |
15.31 |
10.76 |
164.74 |
4. 結(jié)論
我 們建立了利用反相高效液相色譜法快速測定蛋黃中膽固醇的方法，樣品無需皂化處理，直接用乙醚和石油醚進行萃取，大大節(jié)約了樣品前處理時間，操作快速簡便， 具有良好的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性，可做為測定蛋黃中膽固醇含量的有效方法。另膽固醇主要來自人體自身合成，食物中的膽固醇是次要補充。一般常人每日從食物中攝取 膽固醇200mg，即可滿足身體需要。專家建議每天攝入50mg-300mg膽固醇為佳。
