Western Blot 技術(shù)交流第一期內(nèi)我們通過(guò)裂解細(xì)胞，組織等步驟已經(jīng)把蛋白提取出來(lái)，但提出來(lái)后要怎么知道提出的效果怎么樣，怎么才能在同等量上上樣。這就需要進(jìn)行蛋白定量，目前用得最多的定量方法有兩種，一種是 BCA 法，一種是Bradford 法。下面我們?cè)敿?xì)介紹下這兩種定量方法的原理與優(yōu)缺點(diǎn)：

　　BCA 法：

　　BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。其原理是在堿性環(huán)境下 蛋白質(zhì)分子中的肽鏈結(jié)構(gòu)能與 Cu2+絡(luò)合生成絡(luò)合物，同時(shí)將 Cu2+還原成 Cu+。BCA 試劑可敏感特異地與 Cu+結(jié)合，形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物。在 562nm 處有高的光

　　吸收值，顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。使用本試劑盒檢測(cè)靈敏度高，對(duì)不同種類蛋白質(zhì)檢測(cè)變異系數(shù)小，操作簡(jiǎn)單。

　　Bradford 法：

　　Bradford法是最簡(jiǎn)單和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍(lán) G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合后，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在 465-595 nm 處有最大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系，因此可檢測(cè) 595 nm 的光吸收值的大小計(jì)算蛋白的含量。

　　BCA 法

　　優(yōu)點(diǎn) 1. 準(zhǔn)確：變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)染色法(bradford 法)

　　2. 線性范圍寬，檢測(cè)靈敏，檢測(cè)范圍：20-2000 μg/ml

　　3. 與金屬離子、還原劑和螯合劑、去污劑兼容性好

　　4. 質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系 R2 值一般為 0.998

　　缺點(diǎn) 1. 與 Bradford 法相比不能迅速檢測(cè)，需要 37℃孵育 30 min。

　　Bradford 法

　　優(yōu)點(diǎn) 1. 與 BCA 法相比，使用本產(chǎn)品反應(yīng)迅速，即加即檢

　　2. 靈敏度范圍為 100-1500 μg/ml

　　3. 質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系 R2 值一般 0.980

　　缺點(diǎn) 1. 與金屬離子、還原劑和螯合劑、去污劑兼容性差

　　2. 精確度沒(méi)有 BCA 法高