五味子,習(xí)稱北五味子,為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis ( Turcz. ) Baill. 的果實(shí),具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效。研究發(fā)現(xiàn),北五味子含木脂素、有機(jī)酸、揮發(fā)油、多糖等成分。其中,五味子多糖具有保肝、抗疲勞、免疫促進(jìn)、抗氧化及抗衰老和抗腫瘤等藥理作用,具有較好的臨床療效。由于多糖質(zhì)量是保證五味子臨床療效的重要前提,因此就對(duì)五味子中多糖的質(zhì)量評(píng)價(jià),尤其是其質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定的準(zhǔn)確性有了更高的要求。
目前檢測(cè)五味子中多糖的方法主要有高效液相色譜法和比色法,前者因高純度的五味子多糖對(duì)照品難以獲得等因素的制約而較少使用,而后者作為測(cè)量多糖的經(jīng)典方法,操作簡(jiǎn)單易行,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,在五味子多糖的研究中得到了廣泛的應(yīng)用。上海創(chuàng)賽提供五味子酚,69363-14-0,HPLC≥98%,C78-A0823-20mg,價(jià)格640元。
目前測(cè)量五味子多糖的比色法主要有硫酸苯酚法、硫酸蒽酮法、3,5-二硝基水楊酸法( DNS) 等,均是以葡萄糖為對(duì)照品,計(jì)算出樣品中多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法是通過(guò)硫酸水解多糖,脫水生成糠醛或其衍生物,與相應(yīng)的顯色劑顯色后在特定波長(zhǎng)處有最大吸收,硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法顯色原理大致相同,均是多糖在強(qiáng)酸性條件下水解成單糖,單糖再進(jìn)一步脫水形成糖醛衍生物而顯色。然而本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,兩種方法測(cè)定五味子中多糖的結(jié)果相差近10%,原因可能是組成該成分的不同單糖與硫酸苯酚或硫酸蒽酮試劑在反應(yīng)條件方面有不同,從而導(dǎo)致結(jié)果的差異。有關(guān)五味子單糖的組成及兩種顯色方法的最佳反應(yīng)條件尚有待進(jìn)一步研究。上海創(chuàng)賽提供ELISA試劑盒96T/48T,大鼠核因子κB受體活化因子配基Elisa試劑盒,LH-E10218RA-96T,價(jià)格1700元。
DNS 法是通過(guò)DNS 試劑與還原糖共熱產(chǎn)生棕紅色化合物,并在特定波長(zhǎng)處有最大吸收,然后測(cè)定總糖供試液和單糖供試液中的單糖質(zhì)量分?jǐn)?shù),計(jì)算時(shí)再將單糖供試液的單糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)從總糖供試液的單糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)中減去,最終算出多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)。用DNS 法測(cè)定單糖供試品溶液中單糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)時(shí),發(fā)現(xiàn)其吸收值極小,幾乎可以忽略不計(jì)。這一結(jié)果表明五味子多糖提取液中單糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低,原因可能是在水提取五味子多糖前用80%乙醇回流,去除木脂素,單糖等雜質(zhì),消除了它們對(duì)多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定的影響,因此用DNS 法的優(yōu)勢(shì)不明顯。
從各方面的數(shù)據(jù)分析比較后發(fā)現(xiàn),采用苯酚法測(cè)定結(jié)果比較穩(wěn)定,操作簡(jiǎn)單易行,因而可認(rèn)為此法是測(cè)定五味子中多糖較為理想的方法。但因苯酚容易氧化,見(jiàn)光或遇氧即逐漸氧化成淡紅色物質(zhì),因此在測(cè)定中應(yīng)該避光,且操作要迅速。
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