紫外分光光度法測定茶葉中咖啡堿原理

　　咖啡堿結(jié)構(gòu)上的嘌呤環(huán)具有共軛雙鍵體系，因而具有獨(dú)特的吸收光譜，在波長272~274nm處有最大吸收值，其消光度與咖啡堿含量呈線性關(guān)系，所以可通過消光度求其含量。

　　試劑及主要儀器

　　1、電子分析天平

　　2、752分光光度計

　　3、恒溫水浴鍋

　　4、吸濾裝置

　　5、移液管

　　6、錐形瓶

　　7、堿性乙酸鉛溶液：稱取50g堿性乙酸鉛，加水100ml，靜置過夜;上海創(chuàng)賽提供堿式乙酸鉛(AR)，1335-32-6，商品編號：C84-100792-500g，價格184.3元。

　　8、0.01N HCL溶液：取比重1019的濃HCL 0.83ml，稀釋至1升。

　　9、咖啡堿標(biāo)液：準(zhǔn)確稱取100mg咖啡堿(純度不低于99%)溶于100ml水中，作為母液。準(zhǔn)確吸取5.00ml加水至100ml作為工作液。(每毫升含0.05mg)

　　操作方法

　　1、準(zhǔn)確稱取均勻磨碎的茶樣3.0000g于500ml錐形瓶中，加沸水蒸餾450ml，立刻移入沸水浴中，浸提完畢立即趁熱減壓過濾。濾液移入500ml容量瓶中，殘渣用少量熱蒸餾水洗滌2~3次，并將濾液倒入上述容量瓶中，用水稀釋至刻度。

　　2、用移液管準(zhǔn)確吸取試液10.00ml，移入100ml容量瓶中，加入5ml 0.01N的鹽酸和1ml堿性乙酸鉛溶液，用水稀釋至刻度，充分混勻，靜置過濾。準(zhǔn)確吸收25.00ml濾液注入50ml容量瓶中，加入3滴6N硫酸溶液，加水稀釋至刻度、混勻、靜置過濾。用10mm比色杯，在波長274nm處，以試劑空白為溶液參比，測定其吸光度。上海創(chuàng)賽提供752紫外可見分光光度計，商品編號：E52-UV752，詢價。

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