方法一

　　1、稀釋。我們要留血漿(肝素鈉抗凝的采血管采的血，5～6ml)，所以分離、取出血漿后加入和紅細(xì)胞等體積的生理鹽水，一般3ml左右，混勻。上海創(chuàng)賽科技提供肝素鈉，Heparin sodium salt,商品編號(hào)：B11000262-1g，價(jià)格69.3元。

　　2、分離液，不在乎體積有多少，主要是高度，如果離心管很粗的話，就要多加一些，細(xì)一點(diǎn)的離心管就可以少加一些，一般高度要超過3cm。

　　3、分離血來(lái)源，成人外周血比較好分，臍血和胎盤血不好分。當(dāng)然，發(fā)生溶血和凝血的話就更難分了。

　　4、血的保存，采血后不要放到4度冰箱(當(dāng)然更不能凍啦)，常溫，避光即可。從采血到分離不要超過12個(gè)小時(shí)，不然效果也不好。

　　5、離心速度和時(shí)間。不同的離心機(jī)，肯定轉(zhuǎn)速不一樣的，實(shí)驗(yàn)室一般用水平離心機(jī)2500轉(zhuǎn)，20分鐘，基本上沒有紅細(xì)胞了，淋巴細(xì)胞也很多。

　　6、淋巴細(xì)胞分離液的保存不必放在4度，常溫即可，無(wú)論是否開封了的。以往經(jīng)驗(yàn)，分離液一放到4度后，無(wú)論復(fù)溫的效果如何，分離的效果都沒以前好。上海創(chuàng)賽科技提供淋巴細(xì)胞分離液，BR ,商品編號(hào)：D16-1013112-250ml，詢價(jià)。

　　方法二

　　1.用0.85%生理鹽水對(duì)倍稀釋抗凝血液標(biāo)本。

　　2.取淋巴細(xì)胞分離液3-4ml于干凈試管中。

　　3.往淋巴細(xì)胞分離液上層緩緩加入2倍于分離液體積的稀釋外周血量。

　　4.2000-2500RPM轉(zhuǎn)速離心15分鐘。上海創(chuàng)賽科技提供淋E23-TD4M血細(xì)胞洗滌離心機(jī) ,商品編號(hào)：E23-TD4M-臺(tái)，詢價(jià)。

　　5.用吸管吸取中層白色渾濁液于eppendorf管-20℃保存待用。

　　注意事項(xiàng)

　　1、取血的質(zhì)量很重要，分離界面清楚的總是血樣質(zhì)量好的)，用Hanks對(duì)倍稀釋!分離液一般是稀釋血量的1/2!

　　2、離心時(shí)間很有關(guān)系各實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)不同!

　　3、破碎紅細(xì)胞用雙蒸水少于一分鐘。

　　4、試管的干凈程度也有關(guān)系的。

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