實(shí)驗(yàn)試劑

　　1. 10%中性福爾馬林(pH6.8～7.1)甲醛 10ml 蒸餾水 90ml 醋酸鈉 2g

　　2. 酸性磷酸酶作用液

　　蒸餾水 90ml 0.2mol/L醋酸緩沖液(pH4.6) 12ml 5%硝酸鉛 2ml

　　3. 2%β—甘油磷酸鈉 4ml

　　先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合，隨后分成大致相等的兩份，一份中加硝酸鉛溶液，另一份加甘油磷酸鈉溶液，然后再將兩者緩緩混合，邊混邊攪勻后若酸堿度值不到pH5.0，可加少量醋酸的調(diào)整。此作用液最好在臨用前配制，不能貯存。配好后的作用液應(yīng)透明無(wú)絮狀懸浮物和沉淀，否則將嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。上海創(chuàng)賽科技提供9001-77-8,酸性磷酸酶Acid PhosphataseBR,10u/mg，液體 ,商品編號(hào)：D23-RM1170-500U，價(jià)格6080元。

　　4. 1%硫化胺溶液

　　硫化胺 1ml 蒸餾水 9ml

　　5. 姬姆薩染液(1：30)

　　姬姆薩原液 3滴 磷酸鹽緩沖液(pH6.8) 5ml

　　6. 6%淀粉肉湯

　　牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1.0g 氯化鈉 0.5g 蒸餾水 100ml

　　高壓滅菌9.9×104pa(15磅)20min，再加入可溶性淀粉6g，水溫浴，促使溶解后置冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

　　實(shí)驗(yàn)步驟

　　1. 取小白鼠一只，每日腹腔注射6%淀粉肉湯1ml，連續(xù)注射三天。

　　2. 在第三天注射后3～4h，再向腹腔注射生理鹽水1ml，過(guò)3min后在原注射部位抽取腹腔液0.1～0.2ml。請(qǐng)注意!注射和抽液的進(jìn)針部位和深度要保持一致。否則可能抽不出腹腔液。上海創(chuàng)賽科技提供9001-77-8,酸性磷酸酶Acid PhosphataseBR, 0.5-3u/mg，粉末 ,商品編號(hào)：D23-RM1170-100mg，價(jià)格736元。

　　3. 將腹腔液滴在預(yù)冷的載玻片上，每片1～2滴，涂片，將玻片垂直插入玻片架，迅速放到冰箱內(nèi)(4℃)，讓細(xì)胞自行鋪展。

　　4. 30min后，將玻片轉(zhuǎn)入10%中性福爾馬林，冰箱內(nèi)4℃固定30min。

　　5. 自來(lái)水漂洗5min，把水甩干。

　　6. 轉(zhuǎn)入酸性磷酸酶作用液中，37℃處理30min。

　　7. 自來(lái)水漂洗片刻。

　　8. 1%硫化胺處理3～5min。

　　9. 自來(lái)水沖洗，甩干。

　　10.用1∶30的姬姆薩染液染色15min。

　　11.自來(lái)水沖去染液，用磷酸鹽緩沖液臨時(shí)封片，鏡檢。

　　12.對(duì)照實(shí)驗(yàn)：

　　將第3步的腹腔液涂片置50℃溫箱中處理30min，使酶失活，再進(jìn)行6～11步的同樣實(shí)驗(yàn)。

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