1. 取12.5-13.5dpc孕鼠，斷頸處死;

　　2. 將鼠腹面向上放置，70% 酒精潤濕、消毒腹部(防止腹毛飛揚(yáng)，污染內(nèi)臟及子宮)，剪開皮膚層、肌肉層，打開腹腔，將連接在子宮上的結(jié)締組織及脂肪剪去，將子宮取出，轉(zhuǎn)入無菌10cm平皿中;

　　3. 把平皿轉(zhuǎn)入超凈臺(tái);

　　4. 用鑷子打開子宮壁，擠出鼠胚，并與胚外組織、胎盤等分離，除去鼠胚的頭、四肢及各種內(nèi)臟(主要為肝臟、肺臟、心臟和腸胃等);

　　5. 將鼠胚移入另一新的無菌皿，用PBS洗三次;

　　6. 棄去PBS，用彎頭剪將鼠胚剪碎，加入PBS洗至溶液基本無色(1-4次);

　　7. 加入適量Trypsin-EDTA(0.25% )，體積約等于組織塊體積;上海創(chuàng)賽科技提供610769-35-2,Tris Borate EDTA buffer, for molecular biology, 10x, DNAse, RNAse and Protease free, pH 8.3 ,商品編號(hào)：C82-32733-1LT，價(jià)格763元。

　　8. 用滴管輕輕吹勻，室溫下消化1-10分鐘(或消化至溶液渾濁變粘)，加入與消化液等體積培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻(5-10次)，靜置;

　　9. 沉降后將上部溶液輕輕吸出，轉(zhuǎn)入離心管中。

　　10. 將細(xì)胞懸液管離心(1000轉(zhuǎn)5分鐘);

　　11. 棄去上清，向沉淀中加入適量培養(yǎng)基，輕輕吹打重懸，將其分種至10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，作標(biāo)簽(ME-0;注意：若凍存，則可以使用復(fù)蘇后的0代ME制作Feeder;若直接使用則最好不用0代ME細(xì)胞做Feeder，要傳到一代以后再用來制作Feeder比較好)，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)箱培養(yǎng);

　　12. 視細(xì)胞生長情況換液(一般3天換液一次)，若細(xì)胞已長滿，則凍存，或者1：3-5傳代(視細(xì)胞疏密而定)，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)(此后不用再換液);1-5代的ME細(xì)胞均可用來制作Feeder。

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