步驟：

　　1. 前一天下午做好所需數(shù)量的Feeder細(xì)胞板;

　　2. 提前半小時(shí)左右將培養(yǎng)基從4℃冰箱取出，放于室溫(或者放于37℃溫箱內(nèi));

　　3. 將ES細(xì)胞培養(yǎng)皿、Feeder細(xì)胞培養(yǎng)皿從培養(yǎng)箱內(nèi)取出(相差顯微鏡下作常規(guī)觀察，F(xiàn)eeder細(xì)胞應(yīng)生長(zhǎng)良好，細(xì)胞覆蓋95%左右，至少90%以上的培養(yǎng)皿面積);ES細(xì)胞應(yīng)生長(zhǎng)良好，接近長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿，細(xì)胞集落大小一致、疏密均勻，集落形狀規(guī)則、呈橢圓形、邊緣光滑、表面光滑，細(xì)胞生長(zhǎng)致密、核大、胞質(zhì)少;上海創(chuàng)賽科技提供6.0CM一次性細(xì)胞培養(yǎng)皿，平底滅菌，適合細(xì)胞貼壁生長(zhǎng) ,商品編號(hào)：C81-TCD010060-600個(gè)/箱，價(jià)格652.5元。

　　4. 將ES細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)的液體吸出、棄去，用PBS 1 mL左右洗一遍，加入胰蛋白酶溶液，作用約30秒，小心吸出胰蛋白酶溶液，棄去;再作用1—5分鐘，不時(shí)觀察，待細(xì)胞層(皿底一層白色臟東西樣膜)出現(xiàn)裂縫并明顯開(kāi)始下滑時(shí)，補(bǔ)加培養(yǎng)基，適度吹打(視消化程度及管口粗細(xì)而定，至看不到明顯的大的細(xì)胞團(tuán)塊為止);平均分到Feeder培養(yǎng)皿中(滴加，以免將Feeder細(xì)胞吹脫落下來(lái))，滴加補(bǔ)加培養(yǎng)基至5 ml左右(滴加，以免將Feeder細(xì)胞吹脫落下來(lái);若為3.5cm培養(yǎng)皿，則補(bǔ)加至3ml左右)，作好標(biāo)簽;上海創(chuàng)賽科技提供E30-LW300LT生物顯微鏡 ,商品編號(hào)：E30-LW300LT生物顯微鏡，詢價(jià)。

　　5. 前后左右水平晃動(dòng)培養(yǎng)皿，使ES細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)皿中，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

　　CANSPEC性能卓越，細(xì)胞因子，胎牛血清，電泳設(shè)備，標(biāo)準(zhǔn)品，化學(xué)化工，科學(xué)儀器，實(shí)驗(yàn)室耗材，上海創(chuàng)賽，海量產(chǎn)品特價(jià)促銷中，歡迎來(lái)電咨詢!