細(xì)胞內(nèi)的核酸包括DNA與RNA兩種分子，均與蛋白質(zhì)結(jié)合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成脫氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein，DNP)，RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein，RNP)。其中真核生物的DNA又有染色體DNA與細(xì)胞器DNA之分。前者位于細(xì)胞核內(nèi)，約占95%，為雙鏈線(xiàn)性分子;后者存在于線(xiàn)粒體或葉綠體等細(xì)胞器內(nèi)，約占5%，為雙鏈環(huán)狀分子。除此之外，在原核生物中還有雙鏈環(huán)狀的質(zhì)粒DNA;在非細(xì)胞型的病毒顆粒內(nèi)，DNA的存在形式多種多樣，有雙鏈環(huán)狀、單鏈環(huán)狀、雙鏈線(xiàn)狀和單鏈線(xiàn)狀之分。DNA分子的總長(zhǎng)度在不同生物間差異很大，一般隨生物的進(jìn)化程度而增長(zhǎng)。如人的DNA大約由3.0×109個(gè)堿基對(duì)(base pair, bp)組成，與5243bp的猿猴病毒(simian virus 40, SV40)相比，其長(zhǎng)度約為后者的5.7×105倍。相對(duì)來(lái)講，RNA分子比DNA分子要小得多。由于RNA的功能是多樣性的，RNA的種類(lèi)、大小和結(jié)構(gòu)都較DNA多樣化。DNA與RNA性質(zhì)上的差異決定了兩者的最適分離與純化的條件是不一樣的。
材料與方法的選擇
(一)材料與方法的選擇
臨床常見(jiàn)的標(biāo)本有血液、尿液、唾液、組織及培養(yǎng)細(xì)胞等;核酸分離與純化的方法非常多，如何恰當(dāng)?shù)厥占c準(zhǔn)備材料，選擇適宜的分離與純化方法是一個(gè)首要的問(wèn)題。首先我們應(yīng)當(dāng)明確核酸的分離與純化并不是最終的目的，不同的實(shí)驗(yàn)研究與應(yīng)用對(duì)核酸的產(chǎn)量、完整性、純度和濃度可能有不同的要求;至于分離與純化核酸所需的時(shí)間與成本也往往需要考慮;在不影響核酸質(zhì)量的情況下，應(yīng)選擇安全無(wú)毒的試劑與方案。近年來(lái)，有關(guān)試劑盒的開(kāi)發(fā)與自動(dòng)化儀器的使用，能批量制備核酸樣品，大大提高了分離與純化的效率。
(二)選擇的原則
核酸分離與純化的方法很多，應(yīng)根據(jù)具體生物材料的性質(zhì)與起始量、待分離核酸的性質(zhì)與用途而采取不同的方案。無(wú)論采取何種方法，都應(yīng)遵循總的原則：一是保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性，因?yàn)橥暾囊患?jí)結(jié)構(gòu)是核酸結(jié)構(gòu)和功能研究的最基本的要求;二是盡量排除其它分子的污染，保證核酸樣品的純度，這是本章討論的主要內(nèi)容。
(三)核酸完整性的保持
為了保證核酸的完整性，在操作過(guò)程中，首先應(yīng)盡量避免各種有害因素對(duì)核酸的破壞。影響核酸完整性的因素很多，包括物理、化學(xué)與生物學(xué)的因素，其中有些是可以避免的。如過(guò)酸或過(guò)堿，對(duì)核酸鏈中的磷酸二酯鍵有破壞作用，在核酸的提取過(guò)程中，采用適宜的緩沖液，始終控制pH在4～10之間，就可以很好地避免其危害;另外如高溫加熱，除高溫本身對(duì)核酸分子中的化學(xué)鍵的破壞作用外，還可能因煮沸帶來(lái)液體剪切力，因此核酸提取常常在0～4℃的條件下進(jìn)行。上海創(chuàng)賽科技提供脫氧核糖核酸酶(牛胰),DNase I(DeoxyribonueleaseⅠ)|9003-98-9, 商品編號(hào)：B11000133-15ku，價(jià)格314.3元。
其次對(duì)無(wú)法避免的有害因素，應(yīng)采取多種措施，盡量減輕各種有害因素對(duì)核酸的破壞。應(yīng)盡量簡(jiǎn)化分離純化的步驟，縮短提取的時(shí)間，減輕各種有害因素對(duì)核酸完整性的破壞; DNA酶(DNase或DNAase)的激活需要Mg2+、Ca2+等二價(jià)金屬離子，若使用EDTA、檸檬酸鹽并在低溫條件下操作，基本上就可以抑制DNA酶的活性。RNA酶(RNase或RNAase)的廣泛存在與不易失活的特點(diǎn)，決定了生物降解是RNA提取過(guò)程中的主要危害因素。上海創(chuàng)賽科技提供人重組人 RNase A / Ribonuclease A / RNASE1 蛋白 (His 標(biāo)簽)|Ribonuclease, RNase A family, 1 (pancreatic) Protein，商品編號(hào)：C86-134-68-50ug，價(jià)格2210元。
上海創(chuàng)賽科技性能卓越，白介素細(xì)胞因子，胎牛血清，電泳設(shè)備科學(xué)儀器，原料藥標(biāo)準(zhǔn)品，化學(xué)試劑，細(xì)胞培養(yǎng)耗材，上海創(chuàng)賽，海量產(chǎn)品特價(jià)促銷(xiāo)中，歡迎來(lái)電咨詢(xún)!
