鹽析(Salting out)

　　鹽析方法是蛋白質(zhì)和酶提純工作中應(yīng)用最早，至今仍廣泛應(yīng)用的方法。其原理是蛋白質(zhì)在高濃度的鹽溶液中，隨著鹽濃度的逐漸增加，蛋白質(zhì)表面的電荷被中和，水化膜被破壞，蛋白質(zhì)分子相互聚集而從溶液中沉淀析出。鹽析法就是根據(jù)各種蛋白質(zhì)在一定濃度的鹽溶液中溶解度降低程度的不同而達(dá)到彼此分離的方法。

　　在鹽析時(shí)，蛋白質(zhì)的溶解度與溶液中離子強(qiáng)度的關(guān)系可用下式表示：

　　式中S0是蛋白質(zhì)在純水(離子強(qiáng)度I=0)中的溶解度，S 為蛋白質(zhì)在離子強(qiáng)度為I的溶液中的溶解度，KS為鹽析常數(shù)。

　　上述公式中當(dāng)溫度和pH 一定時(shí)，S0僅取決于蛋白質(zhì)的性質(zhì)。因此對(duì)于同一蛋白質(zhì)，在一定溫度和pH時(shí)，S0是一常數(shù)。

　　設(shè) Log S0 =β

　　則 Log S=β-KS×I

　　鹽析常數(shù)KS主要取決于鹽的性質(zhì)(鹽的離子價(jià)數(shù)和離子平均半徑),也和蛋白質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)。不同的蛋白質(zhì)在同一種鹽溶液中的KS值不同，KS值愈大，鹽析效果愈好。從上述公式可知在溫度和pH一定的同一種鹽溶液中，不同蛋白質(zhì)有各自一定的β和KS值?？梢酝ㄟ^(guò)改變鹽的離子強(qiáng)度來(lái)分離不同的蛋白質(zhì)。這種方法稱(chēng)分段鹽析法。對(duì)于同一種鹽溶液，如果保持離子強(qiáng)度不變，通過(guò)改變溫度和pH 來(lái)改變β值，也可達(dá)到鹽析分離的目的。這種方法稱(chēng)為“β分段鹽析法”。

　　鹽析法提純蛋白質(zhì)時(shí)應(yīng)注意以下幾個(gè)條件的選擇。

　　(一)鹽的種類(lèi)

　　蛋白質(zhì)鹽析常用中性鹽。主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。應(yīng)用最廣泛的是硫酸銨，其優(yōu)點(diǎn)是：

　　1.溶解度大 25℃時(shí)硫酸銨的溶解度可達(dá)4.1mol/L(541g/L)以上。大約每升水可溶解767g之多。在這一高溶解度范圍內(nèi)，許多蛋白質(zhì)和酶都可以被鹽析沉淀出來(lái)。上海創(chuàng)賽科技提供7601-54-9，磷酸鈉 一元Sodium phosphate monobasic for HPLC, ≥99.0%，商品編號(hào)：C13-17844-50g，價(jià)格586.62元。

　　2.溫度系數(shù)小硫酸銨的溶解度受溫度影響不大。例如0℃時(shí)，硫酸銨的溶解度仍可達(dá)到3.9mol/L(515g/L)。大約每升水可溶解676g。對(duì)于需要在低溫條件下進(jìn)行酶的純化來(lái)說(shuō)，應(yīng)用硫酸銨是有利的。上海創(chuàng)賽科技提供硫酸銨，Ammonium sulfate，≥99.997% metals basis，7783-20-2，商品編號(hào)：C16-A11026-10g，價(jià)格125元。

　　3.硫酸銨不易引起蛋白質(zhì)變性，對(duì)于很多種酶還有保護(hù)作用，且價(jià)格低廉，容易獲得。

　　硫酸銨的缺點(diǎn)是銨離子干擾雙縮脲反應(yīng)，為蛋白質(zhì)的定性分析造成一定困難。

　　(二) 鹽的濃度

　　分段鹽析法是通過(guò)改變鹽的濃度以達(dá)到分離目的。應(yīng)該將鹽的濃度準(zhǔn)確地分步提高到各種蛋白質(zhì)所需的濃度。鹽的濃度常用飽和度表示，飽和溶液定為100%。調(diào)整硫酸銨溶液飽和度的方法有計(jì)算、查表兩種：

　　1.添加飽和溶液的計(jì)算法

　　如 S2為所需達(dá)到的飽和度，S1為原來(lái)的飽和度,V 為達(dá)到所需飽和度的溶液體積，Vo為原來(lái)的體積。則:

　　體積的改變?cè)斐傻恼`差小于2%，可以忽略不計(jì)。

　　2.查表法(表1-3)

　　可以從表中直接查到將1 升飽和度為S1的鹽溶液濃度提高到飽和度為S2的濃度時(shí)所需添加固體硫酸銨的重量(克)。

　　(三)pH值

　　如前所述，β值與溶液的pH 值有密切關(guān)系。當(dāng)溶液的pH值達(dá)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)時(shí)，β值最小，蛋白質(zhì)的溶解度最低，最易從溶液中析出。因此在鹽析時(shí)，應(yīng)控制溶液的pH值使之接近蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。

　　(四)溫度

　　溫度對(duì)β值的影響不如對(duì)pH 值的影響顯著。因此，對(duì)溫度的要求不嚴(yán)格，低溫主

　　要是防止蛋白質(zhì)變性和降解。

　　(五)蛋白質(zhì)濃度

　　溶液中蛋白質(zhì)濃度愈高，鹽析所需的鹽飽和度愈低。所以，鹽析的蛋白質(zhì)濃度不宜過(guò)低，但過(guò)高的蛋白質(zhì)濃度也不適合，因其會(huì)和其它蛋白產(chǎn)生共沉淀作用而影響純度。

　　上海創(chuàng)賽科技性能卓越，白介素細(xì)胞因子，胎牛血清，電泳設(shè)備科學(xué)儀器，原料藥標(biāo)準(zhǔn)品，化學(xué)試劑，細(xì)胞培養(yǎng)耗材，上海創(chuàng)賽，海量產(chǎn)品特價(jià)促銷(xiāo)中，歡迎來(lái)電咨詢(xún)!