凝膠過濾是利用具有一定口徑范圍的多孔凝膠的分子篩作用對(duì)生物大分子進(jìn)行分離的層析技術(shù)。當(dāng)樣品隨流動(dòng)相經(jīng)過由凝膠組成的固定相時(shí)，分子量大的物質(zhì)不能擴(kuò)散進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，于是隨流動(dòng)相流經(jīng)顆粒之間的狹窄空隙，首先洗脫出層析柱;分子量小的物質(zhì)可以擴(kuò)散進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，比較大分子量物質(zhì)流經(jīng)的載面積寬，流動(dòng)速度慢，而后被洗脫出來。這樣分子量大和分子量小的物質(zhì)便得以分離(圖3-7)。即固定相的網(wǎng)孔對(duì)不同分子量的樣品成分具有不同的阻滯作用，使之以不同的速度通過凝膠柱，從而達(dá)到分離的目的，凝膠過濾又因此得名“分子篩層析”和“凝膠排阻層析”。

　　在實(shí)際工作中，對(duì)于同一個(gè)凝膠柱來說，各種分子量的物質(zhì)有其固定的洗脫體積。因此，準(zhǔn)確掌握凝膠柱的一些基本因素是十分有益的。上海創(chuàng)賽科技提供7320-34-5，焦磷酸鉀，AR ，商品編號(hào)：D16-1005238-500g，價(jià)格52元。

　　凝膠柱的總體積(Vt)：凝膠顆粒之間空隙的體積(外水體積Vo)、凝膠顆粒網(wǎng)眼內(nèi)的體積(內(nèi)水體積Vi)和凝膠顆?；|(zhì)本身的體積(Vr)的總和(圖3-8)。

　　Vt=Vo+Vi+Vr

　　如果被分離的物質(zhì)分子量很大，完全不能進(jìn)入網(wǎng)孔內(nèi)，那末它從柱上洗脫下來(小樣品時(shí)以洗脫峰為準(zhǔn))所需的洗脫液體積(Ve)就等于顆粒間隙的體積(Vo)，即Ve=Vo。如果被分離物質(zhì)的分子量極小，可以非常自由的通過網(wǎng)孔即進(jìn)出凝膠顆粒，那么它的洗脫液體積就應(yīng)當(dāng)?shù)扔陬w粒內(nèi)和顆粒間隙體積的總和(Ve=Vo+Vi)。至于分子量位于上兩者之間的，其洗脫體積便位于Vo 和Vo+Vi 之間?？梢姡肿恿看笮〔煌奈镔|(zhì)，其洗脫體積不同，從而可以用于物質(zhì)的分離。另外，如果在有已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)做對(duì)照的條件下，就可以根據(jù)洗脫體積來估計(jì)待測(cè)物質(zhì)的分子量(圖3-9)。

　　Sephadex G-200(超細(xì)顆粒)柱2.6×70cm，洗脫液：0.05mol/L 磷酸鉀緩沖液，內(nèi)含0.1 mol/LNaCl及0.02%NaN3，流速1ml/cm2/hr。

　　1、過氧化氫酶(210 000)

　　2、醛縮酶(158 000)

　　3、牛血清蛋白(67 000)

　　4、卵清蛋白(43 000)

　　5、糜蛋白酶原A(25 000)

　　6、核糖核酸酶A(13 700)

　　凝膠過濾除用于生物大分子的分離、分子量測(cè)定外，還可用于提純、脫鹽和復(fù)合物組分成分分析等。上海創(chuàng)賽科技提供9003-05-8，聚丙烯酰胺，Polyacrylamide，非離子型，分子量：200萬-1400萬，商品編號(hào)：C16-P10674-500g，價(jià)格68元。

　　適用于做凝膠過濾的材料有多種，主要有葡聚糖凝膠顆粒(Sephadex G)、瓊脂糖凝膠顆粒(Sepharose)和聚丙烯酰胺凝膠顆粒(Bio Gel)等。現(xiàn)將這些凝膠顆粒的種類和某些應(yīng)用數(shù)據(jù)列于表3-2。

　　不論何種凝膠，其共同特點(diǎn)是化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不帶電，與待分離物質(zhì)吸附力很弱，不影響待分離物質(zhì)的生物活性，樣品得率可達(dá)100%，凝膠過濾尚有操作簡(jiǎn)便，凝膠柱不經(jīng)特殊處理便可反復(fù)使用等特點(diǎn)，是近年來被廣泛應(yīng)用的生化技術(shù)之一。上海創(chuàng)賽科技提供卵清蛋白，Albumin from chicken egg white，Grade II，9006-59-1，商品編號(hào)：B11000011-10g，價(jià)格22.4元。

　　上海創(chuàng)賽科技性能卓越，白介素細(xì)胞因子，胎牛血清，電泳設(shè)備科學(xué)儀器，原料藥標(biāo)準(zhǔn)品，化學(xué)試劑，細(xì)胞培養(yǎng)耗材，上海創(chuàng)賽，海量產(chǎn)品特價(jià)促銷中，歡迎來電咨詢!