【實(shí)驗(yàn)原理】
瓊脂糖凝膠電泳與醋酸纖維素薄膜電泳原理基本相同，但兼有分子篩效應(yīng)，從而使不同分子量大小的DNA片段分離。瓊脂糖是從瓊脂中提取出來(lái)的含有較多的酸根和羥基多糖?；厥誅NA的方法很多，主要包括DEAE纖維素紙插片電泳法、透析袋電泳洗脫法、槽溝電泳洗脫法、v形槽電泳洗脫法以及低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠挖塊回收法。本實(shí)驗(yàn)采用瓊脂糖凝膠DNA片段純化試劑盒，此試劑盒采用獨(dú)特的凝膠融解系統(tǒng)，結(jié)合DNA制備膜技術(shù)，具有高效、快速、方便之特點(diǎn)，全套操作只需要30分鐘便可完成。使用此試劑盒每次可純化得到多至10μg 的DNA片段(100bp -30kb ),回收率高達(dá)50-80%。
【器材】
1.紫外分光儀
2.離心機(jī)
【試劑】
1.瓊脂糖凝膠
2.DNA Purification Kit(Takara )
【操作步驟】
1.使用TAE緩沖液制作瓊脂糖凝膠，然后對(duì)目的DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。
2.在紫外燈下切出含有目的DNA的瓊脂糖凝膠，用紙巾吸盡凝膠表面的液體。
3.切碎膠塊。
4.稱量膠塊重量，計(jì)算膠塊體積(1mg =1μl)。
5.向膠塊中加入膠塊融化液DR-I Buffer, DR-I Buffer 的加量如下表：
凝膠濃度
DR-I Buffer使用量
1.0%
3個(gè)凝膠體積量
1.0-1.5%
4個(gè)凝膠體積量
1.5-2.0%
5個(gè)凝膠體積量
6.均勻混合后75℃加熱融化膠塊(低溶點(diǎn)瓊脂糖凝膠只需在45℃加熱)。振蕩混合，使膠塊充分融化(約6-10min)。
7.向上述膠塊融化液中加入DR-I Buffer 量的1/2體積量的DR-II Buffer，均勻混合。當(dāng)分離小于400bp的 DNA片段時(shí)，應(yīng)在此溶液中再加入終濃度為20%的異丙醇。
8.將試劑盒中的Spin Column 安置于Collection Tube上。
9.將上述操作7的溶液轉(zhuǎn)移至Spin Column中，3600rpm 離心1min。
10.將500μl 的Rinse A 加入Spin Column中，3600rpm 離心30Sec，棄濾液。
11.將700μl的Rinse B加入Spin Colum中，Spin Colum中，離心30Sec ，棄濾液。
12.重復(fù)操作步驟11，然后12 000 rpm再離心1min。
13.將Spin Column按置于1.5ml 的離心管上,在Spin Column膜的中央處加入25μl的水或洗脫液,室溫靜置1min。
14.12 000 rpm離心1min 洗脫DNA。
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