防止免疫組化切片干燥的新方法

　　為防止免疫組化切片干燥，我們經過反復摸索，總結出在清洗緩沖液中加入表面活性劑吐溫20(Tween-20)防止干片的方法，已使用2年余，效果良好?，F(xiàn)介紹如下。

　　1、材料與方法

　　1.1材料

　　PBS磷酸鹽緩沖液(0.01mol/L，pH7.2～7.4)、Tween-20、500ml容量瓶和吸水紙。

　　1.2方法

　　取500ml已配制好的PBS磷酸鹽緩沖液置容量瓶中，向瓶中加入2～3滴Tween-20，充分混勻。對10張不同組織的切片按照免疫組化染色步驟行常規(guī)PBS磷酸鹽緩沖液清洗切片后，將切片置入配制好的PBS-Tween-20緩沖液中，上下提拉幾次，讓其均勻覆蓋在整張切片上，再用吸水紙擦去周圍多余的液體，放入濕盒中，即可滴加試劑進行下一步操作。為了防止邊緣效應的發(fā)生，要求距組織邊緣<2mm處擦拭，同時用蠟筆及牙簽方法處理10張對照片。

　　2、結果

　　使用蠟筆組有2例在抗體孵育過程中組織邊緣干燥，發(fā)生了邊緣效應，而加入Tween-20組均未發(fā)生邊緣效應，染色更加均勻。加入Tween-20的緩沖液能夠更好地防止切片干燥。

　　3、討論

　　免疫組化染色中，切片干燥會使抗體與組織發(fā)生非特異性結合，造成假陽性。尤其組織邊緣，如果抗體覆蓋不充分容易發(fā)生干片，造成非特異性染色，即“邊緣效應”[1]。過去常用的方法是使用蠟筆和濕盒，由5蠟筆使用起來比較麻煩，需要經常更換，現(xiàn)多數單位使用專用的免疫組化油筆。使用蠟筆或免疫組化油筆都只能防止滴加的試劑不向四周流失，如果組織偏大就無法保證一次性將滴加的試劑完整覆蓋整個組織，需要借助其他工具(如牙簽等)將抗體覆蓋全部組織，這樣就增加了免疫組化操作的復雜性，還有可能導致抗體覆蓋不均增加干片的可能性。Tween-20為聚氧乙烯去水山梨醇單月桂酸酯和一部分聚氧乙烯雙去水山梨醇單月桂酸酯的混合物。由于其分子中有較多的親水性基團(聚氧乙烯基)，故親水性強，具有乳化、擴散、增溶、穩(wěn)定等性能，是一種常用的非離子性去垢劑和表面活性劑，對人體無害，無刺激性，常用為醫(yī)藥品的乳化劑、擴散劑和穩(wěn)定劑。將切片浸入其中能夠均勻覆蓋整張切片，如同在切片上增加了一層液體膜，不會使組織和切片空白區(qū)形成明顯的分界線，用吸水紙在離組織邊緣<2mm處擦拭后，緩沖液能夠在組織周圍形成一個很清楚的界限，此時滴加的試劑能夠很均勻地分散在所有組織上，讓整張切片染色均勻。由于緩沖液的表面張力作用，被封住的試劑不會向四周流散，且能夠在組織上殘留相對較多的緩沖液，更好地防止了干片的發(fā)生，避免造成邊緣效應。另外，由于Tween-20是去垢劑，也能夠讓組織切片清洗得更干凈，避免了非特異性染色的發(fā)生。該方法在本實驗室已使用2年余，做過多次與不加Tween-20液的對照實驗，發(fā)現(xiàn)Tween-20對免疫組化染色結果無影響，可以放心使用。且PBS-Tween-20緩沖液配制方法簡單，一般實驗室均能完成操作;價格便宜，節(jié)約了醫(yī)療成本并易于推廣應用。

　　參考文獻：

　　[1]周曉鴿。免疫組化染色過程中存在的問題及對策[J]。診斷病理學雜志，2004，1(4)：211-213.