氧電極測(cè)定小麥胚呼吸活性

　　實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：

　　儀器器具：Oxytherm氧電極系統(tǒng)一套;剪刀，雙面刀(或單面切刀或者手術(shù)刀)，1ml移液器，鑷子，吸管，吸水紙，燒杯3個(gè)

　　試劑：測(cè)定介質(zhì)50mmol/L pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液。稱取6.05克Tris(三羥甲基氨基甲烷) 800～900ml水中，滴加1mol/L HCl，調(diào)pH7.5，加水1000ml。除此之外，測(cè)定介質(zhì)還可用磷酸、Hepes、Tricine等pH7.5 50mmol/L的緩沖液。

　　實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1準(zhǔn)備好所需的儀器和試劑，安裝好氧電極，并與計(jì)算機(jī)連接，校正(詳細(xì)操作步驟見廠家提供的說(shuō)明書或漢語(yǔ)說(shuō)明書)，校正結(jié)束后加入2mL緩沖液，開啟轉(zhuǎn)子，走基線(看基線是否穩(wěn)定，測(cè)定前必須保證基線穩(wěn)定)。

　　2均勻選取十個(gè)小麥種子，用手術(shù)刀切下胚

　　3將反應(yīng)杯中的緩沖液吸出，重新加入2mL緩沖液，將切下的胚放入反應(yīng)杯中，測(cè)定曲線如下：

　　4測(cè)定十分鐘后，呼吸速率穩(wěn)定下降，用軟件計(jì)算曲線的斜率(呼吸速率)。假設(shè)曲線斜率為A。

　　5測(cè)定結(jié)束后，將樣品吸出，清洗反應(yīng)杯，重新加入小麥胚，重復(fù)步驟3

　　6小麥種子胚呼吸速率的計(jì)算：

　　呼吸速率Sr(umol O2/Per*s)=曲線斜率A(umol O2/ml*s)*2ml = A/300(umol O2/Per*s)

　　注：假設(shè)曲線斜率為A;Per表示每個(gè)胚

　　注意事項(xiàng)：

　　1首先參考氧電極使用注意事項(xiàng)

　　2測(cè)定胚活性時(shí)只需要切下胚，不需要測(cè)定整個(gè)種子，種子中只有胚有活性

　　3選取小麥種子要均一飽滿，每次測(cè)定數(shù)量一致

　　可以完成該實(shí)驗(yàn)的儀器有：Oxygraph; Oxytherm; Chlorolab-2