實(shí)驗(yàn)所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本最常用、最基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔，供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中首選的組織標(biāo)本制作方法。

　　免疫組化常用的染色方法有哪些?

　　根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用。

　　石蠟切片為什么要做抗原修復(fù)?有哪些方法?

　　石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定，使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行IHC染色時(shí)，需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露，即將固定時(shí)分子之間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法，高壓加熱法，酶消化法，水煮加熱法等，常用的修復(fù)液是pH6.0的0.01 mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。

　　石蠟切片在染色過程中出現(xiàn)脫片現(xiàn)象：

　?、倏酒瑫r(shí)間不夠，或溫度不夠，可以延長烤片時(shí)間和提高烤片溫度;

　?、谟煤卸嗑圪嚢彼岬牟Ｆ?，可以購買到或這自己做;

　?、塾行┙M織本身就容易掉片，如骨組織等，操作時(shí)沖PBS不要直接沖到組織上，沖到組織上方，讓它流下沖洗組織;

　?、苡酶邷匦迯?fù)時(shí)，溫度驟冷也可能引起。

　　它的背景有哪些?

　?、倏紤]一抗?jié)舛雀?

　?、谌缓笳{(diào)整DAB孵育時(shí)間;

　?、垡惨紤]血清封閉時(shí)間是否過短;

　?、苓m當(dāng)增加抗體孵育后的浸洗次數(shù)和延長浸洗時(shí)間等。

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