?綠色植物中葉綠素含量是測定植物所需氮含量的重要因素，是植物進行光合作用的關(guān)鍵因素，因此對植物的生理學研究也是個重要的考核指標。葉綠素測定儀通過測量葉片在兩種波長范圍內(nèi)的透光系數(shù)來確定葉片當前葉綠素的相對數(shù)量,也就是在葉綠素選擇吸收特定波長光的兩個波長區(qū)域，根據(jù)葉片透射光的量來計算測量值。
葉綠素測定儀的測定原理是根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比，即A=αCL式中：α比例常數(shù)。當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時，α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得。
若測定葉綠體色素混合提取液中的葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)可求得其濃度。在測定葉綠素a、b時為了排除類胡蘿卜素的干擾，通常用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的大吸收峰。
在使用葉綠素測定儀進行測量的時候要注意以下7大事項，以保證測量結(jié)果的準確性：
1. 測量面積僅為2mm/SPAN>3mm，能夠用來測量比較小的葉子，樣品厚度可以達到1.2mm。中心線指示測量面積的中心。
2. 用手指按住樣品夾，直到發(fā)出“滴”的一聲測量值出現(xiàn)在顯示屏上為止。測量值會自動儲存在內(nèi)存中。
3. 當直接在太陽光下利用儀器時，用身體給儀器遮住陽光，這樣就不會影響測量結(jié)果。
4. 不要企圖去測量絕對厚的部分，如葉脈。如果測量的葉片有很多的葉脈，好的辦法是進行幾次測量并取平均值。
5. 如果一系列的“滴滴”聲和“---”閃現(xiàn)在顯示屏上，就是錯誤的執(zhí)行了測量步驟（樣品夾沒有完全密封，在測量沒有完成之前樣品夾被打開，或者樣本太厚或太小）。
6. 如果測量值出現(xiàn)小數(shù)點閃現(xiàn)、沒有小數(shù)點或測量值大于50.0 的情況，說明測量精度不能保證，請重新測量。
7. 如果樣品夾的發(fā)射或者接收窗口變臟或者有一些水，就不會有的測量結(jié)果。在測量前請先查看樣品夾窗口是否清潔。
