儀器組成
分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。
儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。
光譜范圍
包括波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~400 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其有的發(fā)射光譜，因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。
鎢燈的發(fā)射光譜：鎢燈光源所發(fā)出的400~760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后，可得到由紅橙，黃綠，藍(lán)靛，紫組成的連續(xù)色譜；該色譜可作為可見光分光光度計(jì)的光源。
氫燈(或氘燈)的發(fā)射光譜：氫燈能發(fā)出185~400 nm波長的光譜可作為紫外光光度計(jì)的光源。
物質(zhì)的吸收光譜
如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液，此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜，它出現(xiàn)了幾條暗線，即光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失，這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。
不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的。因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì)。
當(dāng)光線通過某種物質(zhì)的溶液時(shí)透過的光的強(qiáng)度減弱。因?yàn)橛蟹止庠谌芤旱谋砻娣瓷浠蚍稚?，分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收只有分光可透過溶液。
原理
分光光度計(jì)采用個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生定波長的光源，光線透過測試的樣品后，分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關(guān)系如下式：
A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
式中：A 為吸光度；
I。為入射的單色光強(qiáng)度；
I 為透射的單色光強(qiáng)度；
T 為物質(zhì)的透射率；
k 為摩爾吸收系數(shù)；
L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長；
c 為物質(zhì)的濃度。
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收但可在定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
