單細胞的原位組織提取一直以來都是一項十分困難的工作，這主要受制于組織之間連接致密難以消化，而機械力往往很難地將單個細胞與組織完整的分離。激光切割具有傳統(tǒng)切割技術(shù)所難以匹及的切割精度，是目前一種比較理想的切割手段，因此圍繞激光切割技術(shù)的相關(guān)顯微產(chǎn)品也孕育而生，并在科研領(lǐng)域中越來越受到關(guān)注。但是激光切割也有其局限性，先顯微激光切割往往要從表面開始，無法對深層組織進行切割；另一方面激光的光源往往采用紫外激光光源，這種類型的光源很容易造成組織灼傷，從而影響切割下來樣品的品質(zhì)，因此激光切割的應用發(fā)展也受到了諸多限制。
如今ROWIAK公司推出的一款全新的單細胞分離系統(tǒng)有望解決這一難題。它采用了近紅外雙光子激光切割技術(shù)，在保留了激光切割精度優(yōu)勢的同時，采用近紅外波長的激光從而避免了激光切中對組織灼燒的問題。因此能夠?qū)崿F(xiàn)的原位組織中的單個細胞的分離。
雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)TissueSurgeon
發(fā)育中的青鳉胚胎
青鳉是一種成熟的模式生物，常用于分析發(fā)育和發(fā)育過程中的細胞信號神經(jīng)生物學研究。其中使用表達熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因胚胎是一種揭示胚胎發(fā)育的良好方法。隨著基因技術(shù)的發(fā)展，研究者們越來越多地開始關(guān)注這些標記細胞中轉(zhuǎn)錄組中的信息。雖然單細胞測序技術(shù)發(fā)展迅速，但是從組織中獲得單細胞的手段卻十分有限。目前幾乎沒有手段能夠直接在組織的原位上快速獲取一個細胞，但是基于ROWIAK雙光子切割技術(shù)，研究者成功地在這方面取得了一些進展。
青鳉胚胎中感知神經(jīng)中表達mcherry的細胞成像
研究者為了研究青鳉感覺神經(jīng)分泌細胞細胞群中特定表達m-cherry的轉(zhuǎn)基因細胞的內(nèi)部遺傳信息，將ROWIAK雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)與傳統(tǒng)的顯微操作系統(tǒng)進行結(jié)合，成功實現(xiàn)了對目標細胞的原位分離。
研究者先利用雙光子3D組織切割成像系統(tǒng)對青鳉胚胎中的mcherry細胞進行了定位，然后根據(jù)其細胞群的形態(tài)設(shè)定了切割部位，隨后系統(tǒng)根據(jù)預先設(shè)定的范圍進行切割。待切割完成后使用玻璃微管移液器將目標的細胞部位直接取出，即獲得了目標組織區(qū)域。這種方法能夠在不破壞樣品原位信息的情況下將感興趣的部位直接的分離，這對于揭示生物體的基因表達情況具有著深遠的意義。
從青鳉胚胎中分離特定表達mcherry的細胞團
參考文獻：
Wittbrodt, J. et al. Medaka — a model organism from the Far East. Nature Reviews Genetics 3, 53-64.
Yamamoto, T. (ed.) MEDAKA (Killifish): Biology and strains. Yamamoto, T. (ed.) Keigaku Pub. Co., Tokyo, 1975, pp.365.
Kristin Tessmar-Raible et al.Removal of fluorescently-labeled sensory-neurosecretory cells from forebrain of transgenic Medaka embryos, focusonmicroscop. 2011.
