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提取新鮮心肌組織細(xì)胞內(nèi)線粒體的方案

教育裝備采購(gòu)網(wǎng) 2019-11-27 09:07 圍觀3228次

  提取新鮮心肌組織細(xì)胞內(nèi)線粒體的方案:

  心肌組織切碎后在4 ℃介質(zhì)(0.25 mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4,0-4℃)中制備心肌組織勻漿。勻漿經(jīng)750g、離心10 min后留上清,以9000 g離心20 min 后留沉淀,重新懸浮后以9000 g再離心20 min,棄上清得線粒體.全部操作于4 ℃進(jìn)行。

  培養(yǎng)細(xì)胞提取線粒體.細(xì)胞棄去培養(yǎng)液后,用細(xì)胞收集液作用2到3 min,用scraper,將細(xì)胞收集起來(lái),6000 g離心15 min。棄上清,之后加細(xì)胞勻漿液,用勻漿器或手動(dòng)勻漿管勻漿,將裝有勻漿液的離心管配平后放入普通離心機(jī),以2500 rpm,離心15 min,緩緩取上清液,移入高速離心管中,保存于有冰塊的燒杯中.以17000 rpm離心20 min,棄上清,留取沉淀物。加入0.25mol/L蔗糖與0.003 mol/L氯化鈣液l ml,用吸管吹打成懸液,以17000 rpm離心20 min,將上清吸入另一試管中,留取沉淀物,加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖與0.003mol/L氯化鈣溶液混勻成懸液.即得線粒體。

提取新鮮心肌組織細(xì)胞內(nèi)線粒體的方案

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