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一種慢病毒干擾載體的構(gòu)建及鑒定

　　摘要：本發(fā)明涉及針對(duì)小鼠STAT3基因，構(gòu)建抑制效率最佳的STAT3shRNA慢病毒干擾載體。針對(duì)STAT3基因設(shè)計(jì)4對(duì)shRNA，克隆到慢病毒干擾載體pLenti中，構(gòu)建出干擾載體PLKO.1-STAT3-shRNA-a1、a2、a3或a4，與包裝外殼蛋白質(zhì)粒?(pVSV-g)?和包膜質(zhì)粒(Pax-2)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，上清培養(yǎng)液過(guò)濾后到病毒懸液，測(cè)定病毒滴度后以一定MOI病毒量感染大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞，篩選最佳抑制效率的shRNA干擾載體。PLKO.1-STAT3-shRNA-a1、a2、a3或a4經(jīng)限制性酶切和測(cè)序證明基因插入正確，Westernblot法證實(shí)PLKO.1-STAT3-shRNA明顯降低細(xì)胞內(nèi)STAT3蛋白的表達(dá)。

專(zhuān)利類(lèi)型發(fā)明專(zhuān)利
申請(qǐng)人上海同科生物科技有限公司;
發(fā)明人施佳萍;楊艷菊;
地址200092 上海市楊浦區(qū)赤峰路65號(hào)同濟(jì)大學(xué)科技園805室
申請(qǐng)?zhí)?/b>CN201310370286.8

申請(qǐng)時(shí)間2013年08月23日

申請(qǐng)公布號(hào)CN104419731A

申請(qǐng)公布時(shí)間2015年03月18日

分類(lèi)號(hào)C12N15/867(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;

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一種慢病毒干擾載體的構(gòu)建及鑒定