摘要：本發(fā)明提供了一種布氏桿菌EF-Tu蛋白單克隆抗體MAb及其制備方法與應(yīng)用，通過將EF-Tu基因克隆到pET30a載體中構(gòu)建出原核表達(dá)載體中表達(dá)攜帶His標(biāo)簽的EF-Tu蛋白，并用純化的EF-Tu蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤SP2/0細(xì)胞融合制備雜交瘤細(xì)胞，通過特異性篩選、體外培養(yǎng)、純化而獲得抗馬耳他型布氏桿菌EF-Tu?MAb。本發(fā)明在篩選時(shí)采用原核表達(dá)攜帶GST標(biāo)簽的EF-Tu純化可溶蛋白來包被ELISA板，這樣不僅可以避免篩選到識(shí)別His標(biāo)簽蛋白的MAb，而且可溶的GST-EF-Tu蛋白活性更接近天然的布氏桿菌延伸因子Tu蛋白，保證了雜交瘤細(xì)胞的特異性。Westem?blot結(jié)果表明獲得的MAb能夠與攜帶GST或His標(biāo)簽的布氏桿菌EF-Tu蛋白抗原反應(yīng)，而不與GST標(biāo)簽或大腸桿菌菌體蛋白反應(yīng)，抗體MAb具有強(qiáng)特異性。
- 專利類型發(fā)明專利
- 申請(qǐng)人山東農(nóng)業(yè)大學(xué);
- 發(fā)明人王方昆;趙孝民;李宏梅;劉思當(dāng);趙寧寧;
- 地址271018 山東省泰安市岱宗大街61號(hào)
- 申請(qǐng)?zhí)?/b>CN201510731321.3
- 申請(qǐng)時(shí)間2015年10月30日
- 申請(qǐng)公布號(hào)CN105218668A
- 申請(qǐng)公布時(shí)間2016年01月06日
- 分類號(hào)C07K16/12(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I;A61P31/04(2006.01)I;G01N33/577(2006.01)I;
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