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　　儀器介紹：

智能全控高效液相色譜系統(tǒng)LC-100plus等度配置

　　目的采用高效液相色譜法對小薊中蘆丁成分進(jìn)行定量。方法采用LichrospherC18色譜柱(4.6mm×200mm,5μm),柱溫30℃,甲醇-0.5%醋酸(體積比為35∶65)為流動相,流速1.0mL/min,檢測波長254nm。結(jié)果小薊中蘆丁的含量為0.5808mg/g。結(jié)論經(jīng)過系統(tǒng)的方法學(xué)考察,該方法具有簡便、專屬、穩(wěn)定、可重復(fù)的特點,可用于小薊中蘆丁的含量測定。

　　小薊為菊科植物小薊[Cirsiumsetosum(Willd.)MB.]的干燥地上部分或根,具有涼血止血、祛瘀消腫的功能,可用于治療衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外傷出血、癰腫瘡毒等。小薊中所含有機酸中有蘆丁、咖啡酸等,文獻(xiàn)記載蘆丁、咖啡酸為其止血活性成分。本實驗采用高效液相色譜法測定小薊中蘆丁的含量,方法穩(wěn)定、快速、重現(xiàn)性好。

　　1實驗材料

　　1.1儀器

　　LC-10AT高效液相色譜儀,SPD-10A檢測器,CLASS-LC10色譜工作站;sartoriusBP211D電子天平;SHIMADZUAY220電子天平;KQ-500型超聲波清洗器。

　　1.2試劑與藥物

　　甲醇為色譜純,水為重蒸餾水,其它試劑均為分析純。蘆丁購自中國藥品生物制品檢定所(批號0080-9705)。小薊藥材分別購自江蘇(南京醫(yī)藥股份有限公司,批號020313)、安徽(安徽省亳州市永剛飲片有限公司,批號031205)、上海(上海華宇藥業(yè)有限公司,批號040802),經(jīng)本院藥用鑒定教研室陳建偉教授鑒定為小薊正品[Cirsiumsetosum(Willd.)MB.]。

　　1.3色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

　　1.3.1色譜條件的選擇

　　色譜柱：LichrospherC18(4.6mm×200mm,5μm),柱溫30℃,流動相：甲醇-0.5%醋酸(體積比為35∶65),流速1.0mL/min;檢測波長：254nm。對照品、樣品的高效液相色譜圖見圖1。

　　1.3.2提取溶劑的考察

　　取本品2份,各1.0g,精密稱定,置2個50mL具塞錐形瓶中,分別加入50mL甲醇和50mL40%甲醇,稱重,浸置1h,超聲處理(功率500W,頻率50kHz)40min,補足稱重,濾過;微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。分別吸取上述2份溶液各10μL,注入高效液相色譜儀,按外標(biāo)法以峰面積計算。結(jié)果表明,以體積分?jǐn)?shù)為40%甲醇為提取溶劑效果較好。

　　2方法與結(jié)果

　　2.1溶液制備

　　2.1.1對照品溶液的制備

　　精密稱取蘆丁對照品0.98mg,置25mL容量瓶中,加40%甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。

　　2.1.2供試品溶液的制備

　　各取3個產(chǎn)地藥材粉末(過2號篩)1.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別加入50mL40%甲醇,稱重,浸置1h,超聲處理(功率500w,頻率50kHz)40min,補足稱重,過濾,微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。

　　2.2線性關(guān)系考察

　　分別精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5mL稀釋10mL,依次精密吸取稀釋的對照品溶液10μL注入液相色譜儀,測定其峰面積值,以蘆丁的濃度(g/L)為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為：Y=25845255X-28716,r=0.9996。結(jié)果表明,蘆丁在0.00392～0.0196g/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

　　2.3精密度試驗

　　吸取3號對照品溶液10μL,重復(fù)進(jìn)樣5次,測定其峰面積積分值,RSD=1.503%。表明本法精密度較好。

　　2.4穩(wěn)定性試驗

　　分別于0、1、2、4、6、12、24h精密吸取同一份供試品溶液20μL進(jìn)樣,測定其峰面積積分值,計算6h內(nèi)RSD=1.972%。結(jié)果表明,供試品溶液在6h內(nèi)常溫保存基本穩(wěn)定。

　　2.5重復(fù)性試驗

　　取同一批號小薊樣品共5份,每份1.0g,精密稱定,按供試品溶液的制備方法平行制備5份,分別進(jìn)樣10μL,每份測定2次,平均含量為0.7035mg/g,RSD=1.129%。

　　2.6回收率試驗

　　精密稱取小薊樣品6份,各1.0g,分別精密加入蘆丁對照品適量,按供試品溶液的制備方法制備,每次進(jìn)樣10μL,每份測定2次,取平均值,計算加樣回收率,平均加樣回收率為98.70%,RSD=2.88%。見表1。表1蘆丁加樣回收率測定結(jié)果(略)

　　2.7樣品測定

　　取3個產(chǎn)地的小薊樣品,按供試品溶液的制備方法制備,分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液,注入液相色譜儀,測量峰面積,按外標(biāo)法計算,結(jié)果總平均值為0.5808mg/g。見表2。表2小薊中蘆丁含量測定結(jié)果(略)

　　3小結(jié)

　　對于小薊中蘆丁的含量測定,有人曾采用聚酰胺薄層掃描法[1],此法受薄膜表面光潔度、均勻度、厚薄等因素影響而不太穩(wěn)定,張氏等[2]采用HPLC法測定苦蕎麥中蘆丁含量。查閱文獻(xiàn),還未曾有人用過HPLC法測定小薊中蘆丁含量。本實驗采用HPLC法測定蘆丁含量,具有簡便快速、結(jié)果準(zhǔn)確可靠的特點,可以作為小薊藥材及飲片質(zhì)量控制方法。