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相關(guān)儀器介紹：
高效液相色譜儀EX1600
目的應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定降脂減肥顆粒中葛根素的含量。方法采用Shim-pack-C18柱(5μm,150mm×4.6mm),甲醇-0.1%磷酸(25.3∶74.7)為流動(dòng)相,流速0.9mL/min,檢測(cè)波長為250nm。結(jié)果線性范圍為0.114～0.570μg,r=0.9996,回收率為98.74%,RDS=0.67%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏,可用于該制劑的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法;葛根素;降脂減肥顆粒
降脂減肥顆粒是由何首烏、葛根、三七等10味中藥組成,具有滋補(bǔ)肝腎、養(yǎng)益精血、扶正固本、通絡(luò)定痛、健脾豁痰、明目生津、潤腸通便的功效,用于各型高血脂癥、心腦血管硬化、單純性肥胖、習(xí)慣性便秘、痔瘡出血。方中葛根為主要藥物。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)制劑中葛根素進(jìn)行含量測(cè)定,以便更好地控制其產(chǎn)品質(zhì)量。
1儀器與試藥
日本島津LC-10AT高效液相色譜儀,SPD-10A紫外檢測(cè)器,KQ-250型超聲波處理器。葛根素對(duì)照品購于中國藥品生物制品檢定所(批號(hào)0537-9910,HPLC面積歸一化法,測(cè)定含量為99.26%);降脂減肥顆粒(6g/袋)由吉林森工健今藥業(yè)有限公司提供。其它化學(xué)試劑均為國產(chǎn),AR級(jí)。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件[1]
色譜柱：Diamonsil-C18柱(5μm,4.6mm×150mm);流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸(25.3∶74.7);流速：0.9mL/min;紫外檢測(cè)波長：250nm;理論塔板數(shù)按葛根素計(jì)算,不低于3000;柱溫為室溫。
2.2對(duì)照品溶液的制備
精密稱取葛根素對(duì)照品適量,加甲醇制成每1mL含0.05mg的溶液,搖勻,作為對(duì)照品溶液。
2.3供試品溶液的制備
取本品20g,研細(xì),取1g,精密稱定,加入30%乙醇30mL,置具塞錐形瓶中,稱定重量,超聲處理20min,放冷,再稱定重量,以30%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
2.4陰性對(duì)照溶液的制備
按處方量制備不含葛根藥材的陰性樣品,按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μL,注入液相色譜儀中,按上述條件測(cè)定。結(jié)果表明,陰性對(duì)照溶液色譜圖中與對(duì)照品位置處無干擾,此法可行(見圖1)。
2.5線性關(guān)系考察
精密吸取葛根素對(duì)照品溶液4、8、12、16、20μL,分別注入高效液相色譜儀中進(jìn)行分析。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),以對(duì)照品的峰面積為縱坐標(biāo)作圖,得一條通過原點(diǎn)的直線,回歸方程為：Y=2490376.534X+19847.951,r=0.9996。結(jié)果表明,葛根素在0.114～0.570μg間呈良好的線性關(guān)系。
2.6精密度試驗(yàn)
精密吸取供試品溶液連續(xù)5次重復(fù)進(jìn)樣,測(cè)得相對(duì)偏差RSD=0.53%。
2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取供試品溶液在0、2、4、8h分別進(jìn)樣,結(jié)果葛根素峰面積的RSD=0.24%,表明在8h內(nèi)供試品溶液的葛根素含量穩(wěn)定。
2.8重現(xiàn)性試驗(yàn)
精密稱取同一批號(hào)樣品5份,按供試品溶液的制備方法制備,依法進(jìn)樣分析,樣品中葛根素含量的RSD=1.05%,表明其重現(xiàn)性良好。
2.9加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取葛根素對(duì)照品適量,加入已測(cè)葛根素含量的降脂減肥顆粒樣品(取約1.0g,精密稱定)中,置具塞錐形瓶中,精密加30%乙醇100mL,按供試品溶液的制備方法制備,進(jìn)樣,測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果(略)
2.10含量測(cè)定
按上述方法制備供試品溶液,測(cè)定3批降脂減肥顆粒中葛根素的含量,結(jié)果見表2。表2降脂減肥顆粒中葛根素含量測(cè)定結(jié)果(略)
3討論
根據(jù)葛根素的溶解性,分別以乙醇、30%乙醇為提取溶媒進(jìn)行試驗(yàn),結(jié)果表明,以30%乙醇提取制備供試品溶液能使葛根素提取完全,以甲醇為溶媒制備的溶液中雜質(zhì)峰較少,含量偏低,故選擇以30%乙醇為溶媒制備供試品溶液。
有關(guān)葛根素的高效液相色譜法含量測(cè)定方法較多,流動(dòng)相有采用乙腈、甲醇、水、冰醋酸等系統(tǒng)[2]。我們采用甲醇、水系統(tǒng),色譜分離效果較為滿意,分離度及峰形對(duì)稱性較好。(謝沂楠/編輯)
