采用UPC2/MS/MS分離利培酮的活性對(duì)映體代謝物并用于檢測(cè)代謝穩(wěn)定性
Jennifer Simeone、 Yun Alelyunas、 Mark Wrona和Paul Rainville
背景
許多候選藥物及其代謝物都含有一個(gè)或多個(gè)手性中心。識(shí)別和監(jiān)測(cè)可能存在的各種對(duì)映體是藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中至關(guān)重要的一步。眾所周知，超臨界流體色譜(SFC)是一種可進(jìn)行手性分離的高效技術(shù)。此外，SFC還具有許多優(yōu)勢(shì)，例如分析效率高、分離速度快，以及使用的溶劑與MS兼容等。
解決方案
在本技術(shù)簡(jiǎn)報(bào)中，我們展示了利用UPC2®/MS/MS對(duì)利培酮的活性代謝物9-羥基利培酮進(jìn)行對(duì)映體分離和檢測(cè)。研究人員使用9-羥基利培酮標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行方法優(yōu)化，然后將其應(yīng)用于在人肝臟微粒體中溫育的利培酮樣品。實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)了從母體化合物到羥基代謝物的轉(zhuǎn)化過(guò)程。
本方法被用于分析t在0、15、30、60、90和120 min時(shí)淬滅的溫育樣品，以監(jiān)測(cè)從利培酮母體到9-羥基代謝物的轉(zhuǎn)化過(guò)程。圖2顯示了一個(gè)示例進(jìn)樣，其中9-羥基代謝物的兩個(gè)預(yù)期峰分別位于3.92和4.29 min處。然而，在4.48和4.76 min處還出現(xiàn)了另外兩個(gè)峰，它們可能是文獻(xiàn)報(bào)道的少量7-羥基利培酮代謝物。1
圖1. 利培酮(上)和R/S 9-羥基利培酮(下)。
圖1展示了采用沃特世(Waters®)Trefoil CEL2 3×150 mm，2.5 μm色譜柱，以甲酸銨改性的甲醇為共溶劑所獲得的非手性利培酮及9-羥基利培酮的R和S構(gòu)型的優(yōu)化色譜圖。
圖2. 經(jīng)利培酮微粒體溫育的利培酮(上) 和羥基利培酮(下)在t = 120處的分析結(jié)果。
我們將所獲得的母體化合物、利培酮以及四種羥基代謝物峰的峰面積對(duì)應(yīng)時(shí)間函數(shù)繪制成圖。如圖3所示，多數(shù)母體化合物在30 min內(nèi)轉(zhuǎn)化為代謝物。雖然R和S構(gòu)型無(wú)法得到絕對(duì)確證，但根據(jù)已發(fā)表的數(shù)據(jù)2顯示，該過(guò)程更傾向于形成R-9-羥基利培酮。因此，我們推測(cè)較早洗脫出的峰為R構(gòu)型，而第二個(gè)峰為S構(gòu)型。
圖3. 分別在15、30、60、90和120min后淬滅的溫育母體化合物(利培酮)與羥基代謝物的測(cè)得峰面積-時(shí)間曲線圖。
總結(jié)
UPC2與MS檢測(cè)的結(jié)合有利于利培酮的活性代謝物9-羥基利培酮的對(duì)映體分離。分離化合物的不同手性構(gòu)型是藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中至關(guān)重要的步驟。此外，我們還證明了合相色譜可成功應(yīng)用于代謝穩(wěn)定性研究。
參考文獻(xiàn)
1. G Mannens, ML Huang, W Meuldermans, J Hendirckx, R Woestenborghs, J Heykants. Absorption, metabolism, and excretion of risperidone in humans. Drug Metab Dispos 21: 1134-1141, 1993.
2. N Yasui-Furukori, M Hidestrand, E Spina, G Facciola, MG Scordo, G Tybring. Different Enantioselective 9-Hydroxylation of Risperidone by the Two Human CYP2D6 and CYP3A4 Enzymes. Drug Metab Dispos 29: 1263-1268, 2001.
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