在PCR儀上完成一個(gè)PCR反應(yīng)所需要的時(shí)間決定于以下幾個(gè)因素：

　　1、模塊升溫和降溫時(shí)間

　　2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時(shí)間

　　3、延伸時(shí)間

　　4、循環(huán)次數(shù)

　　下面就以上幾點(diǎn)做一點(diǎn)分析，以便大家了解快速PCR技術(shù)與快速PCR儀的區(qū)別。

　　1、模塊升溫和降溫度時(shí)間

　　PCR儀一般會(huì)標(biāo)明升溫速度和降溫速度，但標(biāo)的大多是最大變溫速度，也就是說是瞬間達(dá)到的速度。而與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的平均升降溫速度只有極少量廠家標(biāo)明。以平均2度和4度(能做到平均升降溫4度的儀器極少)來計(jì)算，從95度降到55度，分別是20秒和10秒，每一個(gè)循環(huán)差20秒鐘。以一般35個(gè)循環(huán)來計(jì)算，影響實(shí)驗(yàn)時(shí)間700秒，也就是不到12分鐘。實(shí)際還要考慮過沖問題，影響時(shí)間還會(huì)少些。

　　2、模塊與PCR管內(nèi)溫度平衡時(shí)間

　　模塊溫度達(dá)到后，PCR管內(nèi)的溫度遠(yuǎn)沒有達(dá)到(塑料和水的導(dǎo)熱系數(shù)比鋁塊差300倍以上)，需要時(shí)間來使二者達(dá)到平衡。一般有四種辦法來減少這一時(shí)間，一是讓模塊溫度過沖，在管內(nèi)溫度快達(dá)到時(shí)降到目標(biāo)溫度，但太高的過沖可能造成實(shí)際溫度過沖，影響PCR反應(yīng)結(jié)果;二是減少PCR反應(yīng)液的體積，但體積變小時(shí)PCR反應(yīng)的可靠性會(huì)降低;三是降低PCR管的厚度，但太薄時(shí)強(qiáng)度不夠;四是增加PCR管與模塊貼附程度。

　　3、延伸時(shí)間

　　延伸時(shí)間與PCR產(chǎn)物的長度和DNA聚合酶的合成速度有關(guān)。如果PCR產(chǎn)物長度少于100bp時(shí)，可能考慮將延伸時(shí)間變?yōu)?(即兩步法);采用高速的DNA聚合酶也是常用的方法，但并不是所有PCR實(shí)驗(yàn)都可以用高速的DNA聚合酶。

　　4、循環(huán)次數(shù)

　　循環(huán)次數(shù)與模板量及檢測要求相關(guān)。

　　所謂快速PCR技術(shù)是將快速PCR儀與超薄管(或特殊貼附技術(shù))以及高速DNA聚合酶等技術(shù)整合在一起，可達(dá)到較短時(shí)間完成PCR反應(yīng)。而一些廠家在向用戶推銷PCR儀時(shí)，不去說明快速PCR技術(shù)，只強(qiáng)調(diào)PCR儀速度快(大都用最大升降溫速度來HuYou用戶)。好像買了快速PCR儀后，原來1個(gè)半小時(shí)的擴(kuò)增時(shí)間變會(huì)縮短成半小時(shí)似的。而用戶采購了快速PCR儀后才發(fā)現(xiàn)并不那么回事。有不少用戶采用快速模式根本就做不出好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。特別是進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增的用戶，如公安系統(tǒng)用于身份鑒定的試劑。

　　快速PCR技術(shù)與快速PCR儀是兩回事?？焖貾CR儀最多只能縮短PCR反應(yīng)時(shí)間10分鐘左右，要實(shí)現(xiàn)真正的快速PCR反應(yīng)，還需要其他一些努力。大多數(shù)用戶根本就不需要快速PCR技術(shù)。