一、實驗原理

　　由于莢膜與染料間的親和力弱，不易著色，通常采用負染色法染莢膜，即設法使菌體和背景著色而莢膜不著色，從而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜的含水量在90%以上，故染色時一般不加熱固定，以免莢膜皺縮變形。

　　二、實驗方法

　　推薦以下四種染色法，其中以濕墨水方法較簡便，并且適用于各種有莢膜的細菌。如用相差顯微鏡檢查則效果更佳。

　　1、負染色法：

　　(1)制片：取潔凈的載玻片一塊，加蒸餾水一滴，取少量菌體放入水滴中混勻并涂布。

　　(2)干燥：將涂片放在空氣中晾干或用電吹風冷風吹干。

　　(3)染色：在涂面上加復紅染色液染色2—3min。

　　(4)水洗：用水洗去復紅染液。

　　(5)干燥：將染色片放空氣中晾干或用電吹風冷風吹干。

　　(6)涂黑素：在染色涂面左邊加一小滴黑素，用一邊緣光滑的載玻片輕輕接觸黑素，使黑素沿玻片邊緣散開，然后向右一拖，使黑素在染色涂面上成為一薄層，并迅速風干。

　　(7)鏡檢：先低倍鏡，再高倍鏡觀察。

　　結果：背影灰色，菌體紅色，莢膜無色透明。

　　2、濕墨水法

　　(1)制菌液：加1滴墨水于潔凈的載玻片上，挑少量菌體與其充分混合均勻。

　　(2)加蓋玻片：放一清潔蓋玻片于混合液上，然后在蓋玻片上放一張濾紙，向下輕壓，吸去多余的菌液。

　　(3)鏡檢：先用低倍鏡、再用高倍鏡觀察。

　　結果：背景灰色，菌體較暗，在其周圍呈現(xiàn)一明亮的透明圈即為莢膜。

　　3、干墨水法

　　(1)制菌液：加1滴6%葡萄糖液于潔凈載玻片一端，挑少量膠質(zhì)芽胞桿菌與其充分混合，再加1環(huán)墨水，充分混勻。

　　(2)制片：左手執(zhí)玻片，右手另拿一邊緣光滑的載玻片，將載玻片的一邊與菌液接觸，使菌液沿玻片接觸處散開，然后以30度角，迅速而均勻地將菌液拉向玻片的一端，使菌液鋪成一薄膜。

　　(3)干燥：空氣中自然干燥。

　　(4)固定：用甲醇浸沒涂片，固定1 min，立即傾去甲醇。

　　(5)干燥：在酒精燈上方，用文火干燥。

　　(6)染色：用甲基紫染1—2min。

　　(7)水洗：用自來水輕洗，自然干燥。

　　(8)鏡檢：先用低倍鏡再高倍鏡觀察。

　　結果：背景灰色，菌體紫色，莢膜呈一清晰透明圈。

　　4、Tyler法

　　(1)涂片：按常規(guī)法涂片，可多挑些菌體與水充分混合，并將粘稠的菌液盡量涂開，但涂布的面積不宜過大。

　　(2)干燥：在空氣中自然干燥。

　　(3)染色：用Tyler染色液染5—7min。

　　(4)脫色：用20%CuSO4水溶液洗去結晶紫，脫色要適度(沖洗2遍)。用吸水紙吸干，并立即加1—2滴香柏油于涂片處，以防止CuSO4結晶的形成。

　　(5)鏡檢：先用低倍鏡再用高倍鏡觀察。觀察完畢后注意用二甲苯擦去鏡頭上的香柏油。

　　結果：背景藍紫色，菌體紫色，莢膜無色或淺紫色。

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　　三、注意事項

　　1、加蓋玻片時不可有氣泡，否則會影響觀察。

　　2、應用干墨水法時，涂片要放在火焰較高處并用文火干燥，不可使玻片發(fā)熱。

　　3、在采用Tyler法染色時，標本經(jīng)染色后不可用水洗，必須用20%CuSO4沖洗。