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熒光顯微鏡基本信息及作原理

教育裝備采購(gòu)網(wǎng) 2016-07-01 08:46 圍觀597次

  熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) : 熒光顯微鏡是以紫外線為光源, 用以照射被檢物體, 使之發(fā)出熒光, 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對(duì)這類物質(zhì)行定性和定量研究的具之。

  作原理

  折疊光源

  多采用200W的壓汞燈作光源,它是用石英玻璃制作,中間呈形,內(nèi)充定數(shù)量的汞,作時(shí)由兩個(gè)電間放電,引起水銀蒸發(fā),內(nèi)氣壓迅速升,當(dāng)水銀蒸發(fā)時(shí),可達(dá)50~70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力,這過(guò)程般約需5~15min。壓汞燈的發(fā)光是電間放電使水銀分子不斷解離和還原過(guò)程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光,足以激發(fā)各類熒光物質(zhì),因此,為熒光顯微鏡普遍采用。

  壓汞燈也散發(fā)大量熱能。因此,燈室須有良好的散熱條件,作環(huán)境溫度不宜太。

  新型壓汞燈在使用初期不需電壓即可引燃,使用些時(shí)間后,則需要壓?jiǎn)?dòng)(約為15000V),啟動(dòng)后,維持作電壓般為50~60V,作電流約4A左右。200W壓汞燈的平均壽命,在每次使用2h的情況下約為200h,開(kāi)動(dòng)次作時(shí)間愈短,則壽命愈短,如開(kāi)次只作20min,則壽命降低50%。因此,使用時(shí)盡量減少啟動(dòng)次數(shù)。燈泡在使用過(guò)程中,其光效是逐漸降低的。燈熄滅后要等待冷卻才能重新啟動(dòng)。點(diǎn)燃燈泡后不可立即關(guān)閉,以免水銀蒸發(fā)不而損壞電,般需要等15min。由于壓汞燈壓力很,紫外線強(qiáng)烈,因此燈泡須置燈室中方可點(diǎn)燃,以免傷害眼睛和發(fā)生炸時(shí)成操作。

  壓汞燈(100W或200W)光源的電路和包括變壓、鎮(zhèn)流、啟動(dòng)幾個(gè)分。在燈室上有調(diào)節(jié)燈泡發(fā)光中心的系統(tǒng),燈泡后面安裝有鍍鋁的凹面反射鏡,前面安裝有集光透鏡。

  產(chǎn)壓汞燈GCQ-200型性能良好,可以代替HBO-200等型的口燈泡,平均壽命在200h以上,價(jià)格也低。

  我研制的種簡(jiǎn)易輕便型色溫溴鎢熒光光源裝置,體積小,重量輕,率小,交、直流兩用(自帶直流電源),易于攜帶,使用方便,已推廣應(yīng)用。

  折疊濾色系統(tǒng)

  濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要位,由激發(fā)濾板和壓制濾板組成。濾板型號(hào),各廠家名稱常不統(tǒng)。濾板般都以基本色調(diào)命名,前面字母代表色調(diào),后面字母代表玻璃,數(shù)字代表型號(hào)點(diǎn)。如德產(chǎn)品(Schott)BG12,就是種藍(lán)色玻璃,B是藍(lán)色的個(gè)字母,G是玻璃的個(gè)字母;我產(chǎn)品的名稱已統(tǒng)用拼音字母表示,如相當(dāng)于BG12的藍(lán)色濾板名為QB24,Q是青色(藍(lán)色)拼音的個(gè)字母,B是玻璃拼音的個(gè)字母。不過(guò)有的濾板也可以透光分界濾長(zhǎng)命名,如K530,就是表示壓制濾長(zhǎng)530nm以下的光而透過(guò)530nm以上的光。還有的廠家的濾板以數(shù)字命名,如美Corning廠的NO:5-58,即相當(dāng)于BG12。

  1.激發(fā)濾板 根據(jù)光源和熒光色素的點(diǎn),可選用以下三類激發(fā)濾板,提供定波長(zhǎng)范圍的激發(fā)光。

  紫外光激發(fā)濾板:此濾板可使400nm以下的紫外光透過(guò),阻擋400nm以上的可見(jiàn)光通過(guò)。常用型號(hào)為UG-1或UG-5,外加塊BG-38,以除去紅色尾波。

  紫外藍(lán)光激發(fā)濾板:此濾板可使300~450nm范圍內(nèi)的光通過(guò)。常用型號(hào)為ZB-2或ZB-3,外加BG-38。

  紫藍(lán)光激發(fā)濾板:它可使350~490nm的光通過(guò)。常用型號(hào)為QB24(BG12)。

  大吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達(dá)明色素)可用藍(lán)綠濾板(如B-7)激發(fā)

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