一、驗證目的
通過對培養(yǎng)基的靈敏度驗證來增加無菌檢查的可信度
二、原理
不同種培養(yǎng)基內(nèi)加入符合其生長條件的已知菌株做生長實驗，根據(jù)加入定量細菌的生長情況來評價改培養(yǎng)基靈敏度。菌量越少說明培養(yǎng)基靈敏度越高。
三、儀器設(shè)備
無菌室（操作間凈化級別小于10000級，局部凈化小于100級，室溫18-26℃，相對濕度40-60%）、恒溫培養(yǎng)箱（30-35℃）、恒溫培養(yǎng)箱（20-25℃）、高壓滅菌器、干烤箱（250℃）、相差顯微鏡等。
培養(yǎng)基：需氣菌、厭氧菌培養(yǎng)基（硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基）；真菌培養(yǎng)基（改良馬丁培養(yǎng)基）上海創(chuàng)賽科技提供改良馬丁培養(yǎng)基，商品編號：C015222-250g，價格80元。
測試菌種：金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、白色念珠菌、生孢梭菌。上海創(chuàng)賽科技提供金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基，BR ，商品編號：D16-1028481-500g，詢價。
四、驗證實施
1、培養(yǎng)基配置：
分別稱取硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基7.5克，改良馬丁培養(yǎng)基7.0克，分別加250ml蒸餾水，熱溶解，分裝10ml/管，高壓滅菌116℃，20分鐘。上海創(chuàng)賽科技提供液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基，商品編號：C015190-250g，價格115元。
2、測試均的培養(yǎng)：
在無菌操凈臺內(nèi)，分別取金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、生孢梭菌菌液少量，接種在硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（10ml/管）中，在30-35℃培養(yǎng)24小時；取白色念珠菌菌液少量，接種在改良馬丁培養(yǎng)基中，在20-25℃培養(yǎng)24小時，此時的培養(yǎng)液稱為原菌液。上海創(chuàng)賽科技提供蛋白酶（枯草桿菌），9014-01-1，BR,150u/mg，商品編號：D23-RM1036-1g，價格480元。
3、測試菌計數(shù)：采用原菌培養(yǎng)液直接稀釋、計數(shù)板計數(shù)法
①分別取已經(jīng)培養(yǎng)好的原菌液1ml，用生理鹽水稀釋10倍
②用一片干凈的蓋玻片在一干凈計數(shù)玻片上
③吸少量含菌培養(yǎng)液接觸蓋玻片的邊緣
④在相差顯微鏡400倍下觀察，并且按一小方塊所見的每一個細菌大約相當2x107細菌/ml計算細菌濃度。
4、原菌液稀釋：
將上述原菌液根據(jù)細菌計數(shù)結(jié)果，分別用生理鹽水稀釋至10~100個菌/ml。
5、靈敏度實驗：
分別將4稀釋菌液1ml接種到1配置的10ml/管培養(yǎng)基中，每種菌液接種3管培養(yǎng)基，以未接種的培養(yǎng)基為陰性對照，按規(guī)定的條件培養(yǎng)5天，并逐日記錄。上海創(chuàng)賽科技提供念珠菌BCG瓊脂基礎(chǔ)，Candida BCG Agar Base ，商品編號：BD-283510-500g，價格3070.06元。
6、結(jié)果判定：
一每種菌液接種的培養(yǎng)基不得少于2管呈陽性。即該培養(yǎng)基的靈敏度符合要求。
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