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免疫共沉淀方法進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測的優(yōu)缺點(diǎn)

教育裝備采購網(wǎng) 2016-10-20 10:33 圍觀1221次

  免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。

  當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時,完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在argarose beads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進(jìn)行檢測,進(jìn)而證明兩者間的相互作用。

  優(yōu)點(diǎn):

  1.于天然狀態(tài)下相互作用的蛋白質(zhì)。

  2.蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的,可以避免人為的影響。

  3.分離得到相互作用蛋白的天然符合物。

  缺點(diǎn):

  1.低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用可能檢測不到。

  2.兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能有第三者參與,而非直接結(jié)合。

  實(shí)驗前預(yù)測可能的結(jié)合蛋白非常重要,以此選擇最后檢測的抗體,若預(yù)測不準(zhǔn)確,實(shí)驗就得不到結(jié)果,方法本身存在風(fēng)險

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