飼養(yǎng)層細(xì)胞(Feeder)的制備

　　注：含10 ug/ml絲裂霉素C的DMEM血清培養(yǎng)基(FBS占10%)(實驗室所用MMC為10 mg/mL，Calbiochem)

　　1.棄去細(xì)胞培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液，加入適量含10ug/ml絲裂霉素C的培養(yǎng)基(DMEM+10% FBS);上海創(chuàng)賽科技提供絲裂霉素C,Mitomycin C,≥970 µg/mg,USP31,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng),50-07-7,商品編號：C84-1164-5mg，價格259元。

　　2. 放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)3小時(2-4小時);

　　3. 用0.1% 明膠處理培養(yǎng)皿(將明膠加入，搖動使明膠覆蓋全部皿底，然后吸出明膠棄去即可)，室溫放置2小時以上，至皿底明膠干燥為止;上海創(chuàng)賽科技提供明膠，Gelatin,商品編號：B11000719-100g，價格241.5元。

　　4. 棄去含有絲裂霉素C的培養(yǎng)基，加入2-3 mL PBS，輕輕搖動，棄去PBS，如此洗3-5次(必須洗3次以上，以便徹底洗去殘存的絲裂霉素，絲裂霉素是有絲分裂抑制劑，因而對ES細(xì)胞有毒性);

　　5. 加入適量胰酶消化30秒，吸去消化液，靜置至細(xì)胞層出現(xiàn)裂縫或明顯滑壁為止，加入培養(yǎng)基，吹打，種至明膠處理過的培養(yǎng)皿中即可(如細(xì)胞過稀，可再補加絲裂霉素處理過的細(xì)胞)，半小時后即可使用(如果急用，則可以用ES細(xì)胞培養(yǎng)基終止消化，然后與ES細(xì)胞一起轉(zhuǎn)入明膠處理過的新板上)，可使用6-10天，用前更換培養(yǎng)液(如未用明膠處理培養(yǎng)皿，則需在培養(yǎng)箱中放置2小時以上方可使用;最好是前一天下午制作Feeder，第二天上午使用，這時的Feeder狀態(tài)最好，最適于ES細(xì)胞貼壁生長，而且萬一制作的Feeder在第二天早上發(fā)現(xiàn)出了問題，還可以趕緊補做)。上海創(chuàng)賽科技提供8049-47-6,胰酶(11×USP)，Pancreatin-11.0 from hog pancreas,商品編號：C84-0033-100g，價格364.8元。

　　本產(chǎn)品由上海創(chuàng)賽品質(zhì)提供，CANSPEC性能卓越，現(xiàn)貨促銷，生化試劑，化學(xué)化工，科學(xué)儀器，實驗室耗材，上海創(chuàng)賽，海量產(chǎn)品特價促銷中，歡迎來電咨詢!