PCR反應(yīng)常見的污染表現(xiàn)為：標本間交叉污染，PCR試劑污染、PCR擴增產(chǎn)物污染以及實驗中兊隆質(zhì)粒的污染。為了有效地避克這些污染，使得實驗的結(jié)果更準確、更直觀:
1. 合理分隔實驗室
將樣品的處理、配制PCR反應(yīng)液、PCR循環(huán)擴增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進行，特別注意樣本處理及PCR產(chǎn)物的鑒定應(yīng)不其他步驟嚴格分開。最好能劃分出標本處理區(qū)、PCR反應(yīng)液制備區(qū)、PCR循環(huán)擴增區(qū)。各區(qū)的實驗用品及吸樣槍應(yīng)與用，實驗前應(yīng)將實驗室用紫外線消毒以破壞殘留的DNA或RNA。
2. 預(yù)混和分裝PCR試劑
所有的PCR試劑都應(yīng)小量分裝，如有可能，PCR反應(yīng)液應(yīng)預(yù)先配制好，然后小量分裝，-20℃保存。以減少重復(fù)加樣次數(shù)，避克污染。另外，PCR試劑，PCR反應(yīng)液應(yīng)于樣品及PCR產(chǎn)物分開保存，不應(yīng)放于同一冰盒或同一冰箱。
3. 設(shè)立適當?shù)年栃詫φ蘸完幮詫φ?/p>
陽性對照以能出現(xiàn)擴增條帶的最低量的標準病原體核酸為宜，注意交叉污染的可能性，每次反應(yīng)都應(yīng)有一管不加模板的試劑對照及相應(yīng)不含有被擴增核酸的樣品作陰性對照。
4. 防止RNA酶污染
首先，所有的玱璃器皿均應(yīng)在使用前亍180℃的高溫下干烤6hr或更長時間;其次，塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡活用氯仿沖洗(注意：有機玱璃器具因可被氯仿腐蝕，故丌能使用)，幵丏，有機玱璃的電泳槽等，可先用去污劑洗滌，雙蒸水沖洗，乙醇干燥，再浸泡在3%H2O2室溫10min，然后用0.1%DEPC水沖洗，晾干;再者，配制的溶液應(yīng)盡可能的用0.1%DEPC，在37℃處理12hr以上。然后用高壓滅菌除去殘留的DEPC。不能高壓滅菌的試劑，應(yīng)當用DEPC處理過的無菌雙蒸水配制，然后經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌。
5. 實驗人員規(guī)范的操作
RNA操作過程中，實驗人員應(yīng)佩戴一次性口罩、帽子、手套(不含熒光物質(zhì))，試驗過程中手套要勤換，使用一次性移液槍吸頭(帶濾嘴自卸式)，設(shè)置RNA操作與用實驗室，所有器械等應(yīng)為與用;上海創(chuàng)賽科技提供epIIPS 獨立包裝 50-1000ul,生物純級 吸頭，100個/包，現(xiàn)貨，商品編號：C55-0030010035，價格391元。
使用超凈工作臺(負壓式)或防污染罩進行試劑準備和標本處理，以防止對環(huán)境的污染。
最好在每次實驗前后都要對操作臺、移液器、離心機、PCR擴增儀等儀器設(shè)備用10%次氯酸或75%乙醇擦拭消毒。
廢棄物、有害有毒的標本及試劑應(yīng)妥善放置及與人處理。
移液槍的使用方法，所有的液體都要緩慢加至管底，不要加至管壁，使用振蕩器混勻體系，不能用移液器吹打。
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