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生物大分子的基本制備技術(shù)

教育裝備采購網(wǎng) 2016-11-29 11:34 圍觀511次

  生物大分子的基本制備技術(shù)

  生物大分子的制備過程包括選材、細(xì)胞破碎和細(xì)胞器分離、生物大分子提取純化、以及樣品濃縮干燥和儲存等。生物大分子的制備是一項(xiàng)十分細(xì)致的工作,既要設(shè)法得到它們的純品,又要努力保持其生物活性。有時(shí)制備一個(gè)純度較高的蛋白質(zhì)、酶或核酸,需要付出較長時(shí)間的艱苦勞動。生物大分子制備方法的選擇是以生物大分子的理化性質(zhì)為依據(jù)的(表1-1)。對于理化性質(zhì)不同的生物大分子,所選用的分離提純方法也不相同上海創(chuàng)賽科技提供9025-64-3| 脫氧核糖核酸酶Ⅱ(豬脾)Deoxyribonuclease I(Bovine pancrease)BR,1000u/mg,Type V ,商品編號:D23-RM1050-30KU,價(jià)格1120元。

  生物大分子的理化性質(zhì)與分離純化方法的選擇

  

  在生物大分子的制備過程中,為隨時(shí)了解所用方法和條件的效果,以及提取物質(zhì)的純度和得率,必須對所提取的生物大分子進(jìn)行追蹤分析鑒定。因此在提純以前,必須建立對所提取生物大分子相應(yīng)的分析鑒定方法。

  以蛋白質(zhì)的分離純化過程為例,在分離、純化過程中,每進(jìn)行一個(gè)步驟都需對所得樣品的比活性(總活性/總蛋白)、得率(每一步驟總活性與第一步總活性的百分比,設(shè)開始時(shí)的總活性為100%)和提純倍數(shù)(每一步驟比活性與第一步比活性的比值,設(shè)開始時(shí)為1)進(jìn)行測定。一般認(rèn)為所得樣品的比活性和得率越高以及純化倍數(shù)越大則效果越好。但實(shí)際應(yīng)用中往往須考慮多方面的因素來選擇和確定提純方法及步驟,如對提純樣品純度和活性的要求、原材料的來源、實(shí)驗(yàn)條件以及所用材料的價(jià)格等都是我們要考慮的。

  下面是從豬肝中提純異檬酸脫氫酶的過程。該提取過程有六個(gè)步驟,現(xiàn)將每一步驟所得樣品的比活性、得率和純化倍數(shù)等追蹤測定結(jié)果列于表1-2。據(jù)此結(jié)果可判斷每一步驟的提純效果。上海創(chuàng)賽科技提供9029-12-3,谷氨酸脫氫酶,Glutamate Dehydrogenase,>10 U/mg,BC ,商品編號:C84-0103-150U,價(jià)格1168.5元。

  

  從表1-2可知豬肝異檸檬酸脫酶被提純570倍,得率是25.5%。

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