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親和層析原理(Affinity Chromatography)

教育裝備采購(gòu)網(wǎng) 2016-12-19 10:38 圍觀1358次

  親和層析法是近年來(lái)廣為重視并得到迅速發(fā)展的提純、分離方法之一。許多物質(zhì)都具有和某化合物發(fā)生特異性可逆結(jié)合的特性。例如:酶與輔酶或酶與底物(產(chǎn)物或競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑等),抗原與抗體,凝集素與受體,維生素與結(jié)合蛋白,凝集素與多糖(或糖蛋白、細(xì)胞表面受體),核酸與互補(bǔ)鏈(或組蛋白、核酸多聚酶、結(jié)合蛋白)以及細(xì)胞與細(xì)胞表面特異蛋白(或凝集素)等。親和層析法就是利用化學(xué)方法將可與待分離物質(zhì)可逆性特異結(jié)合的化合物(稱配體)連接到某種固相載體上,并將載有配體的固相載體裝柱,當(dāng)待提純的生物大分子通過(guò)此層析柱時(shí),此生物大分子便與載體上的配體特異的結(jié)合而留在柱上,其他物質(zhì)則被沖洗出去。然后再用適當(dāng)方法使這種生物大分子從配體上分離并洗脫下來(lái),從而達(dá)到分離提純的目的(圖3-10)。上海創(chuàng)賽科技提供9008-97-3,植物血球凝集素Phytohemagglutinin BR,商品編號(hào):D23-RD1047-1g,價(jià)格560元。

  

  親和層析由于是配體與待分離物質(zhì)進(jìn)行特異性結(jié)合,所以分離提純的效率極高,可提高純度幾千倍,是當(dāng)前最為理想的提純和濃縮方法。親和層析的配體與待分離物質(zhì)特異性結(jié)合性質(zhì)還可用來(lái)從變性的樣品中提取出其中未變性的部分,從大量污染的物質(zhì)中提純小量所需成分,親和層析還可用來(lái)從極度稀薄的液體中濃縮其溶質(zhì)。上海創(chuàng)賽科技提供葡聚糖凝膠G-50中顆粒,Sephadex G-50 medium,商品編號(hào):B11000414-25g,價(jià)格504元。

  親和層析所用的載體和凝膠過(guò)濾所要求的凝膠特性相同,即化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,不帶電荷,吸附能力弱,網(wǎng)狀疏松,機(jī)械強(qiáng)度好,不易變形,能保障流速的物質(zhì)。聚丙烯酰胺凝膠顆粒、葡聚糖凝膠顆粒以及瓊脂糖凝膠顆粒都可用,其中以瓊脂糖凝膠(Sepharose4B)型應(yīng)用最廣泛。親和層析的關(guān)鍵是設(shè)法選擇合適的配體,并將此配體與載體以化學(xué)方法連接起來(lái),形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵,這需要在實(shí)際工作中根據(jù)需要加以選擇和試驗(yàn)。上海創(chuàng)賽科技提供61970-08-9,瓊脂糖凝膠 CL-4B,BR ,商品編號(hào):D16-1027316-100ml,價(jià)格460元。

  

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