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梯度離心技術(shù)

教育裝備采購網(wǎng) 2017-01-03 11:15 圍觀1095次

  梯度離心是待分離的物質(zhì)在具有密度梯度的介質(zhì)中進行的離心。梯度離心可分為兩種,即密度梯度離心(又稱沉降速度離心、速度區(qū)帶離心或差速區(qū)帶離心)和平衡密度梯度離心(等密度梯度離心和沉降平衡離心)

  1.密度梯度離心

  密度梯度離心(Density gradient centrifugation)是在密度梯度介質(zhì)中進行的一種沉降速度離心。常用有機物如蔗糖或甘油來制作梯度。梯度的作用是使離心液穩(wěn)定以減少擴散或得到較為鋒利的區(qū)帶。被離心的物質(zhì)根據(jù)其沉降系數(shù)不同進行分離,同類物質(zhì)則因分子大的沉降速度快于分子小的物質(zhì)(見公式5)從而得到分離(圖5-1)。

  

  密度梯度離心和差速離心一樣是依賴時間的,離心時間過長已經(jīng)分離的物質(zhì)均可沉到管底或某一介質(zhì)密度區(qū)域(圖5-2)。

  

  2.平衡密度梯度離心

  平衡密度梯度離心(Equilibrium Density Gradient Centrifugation)雖然也是在密度梯度介質(zhì)中進行的離心,但被分離的物質(zhì)是依靠它們的密度不同進行分離的,此種離心常用無機鹽類(如氯化銫CsCl)制作密度梯度。在梯度介質(zhì)中,當被分離的物質(zhì)分別達到與其密度相同的介質(zhì)部位時就不再移動,從而達到分離的目的(圖5-3)。例如,DNA在平衡密度梯度離心過程中,停留在密度梯度為1.7g/cm的位置,而RNA停止在1.9g/cm 的部位。由此可見平衡密度梯度離心是不依賴于時間的,只要梯度不破壞,時間延長不影響分離(圖5-3)

  

  常用詞匯

  離心Centrifugation

  離心機Centrifuge

  超速離心機Ultracentrifuge

  差速離心Differential Centrifugation

  沉降系數(shù)Sedimentation Coefficient

  密度梯度離心Density Gradient Centrifugation

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