【基本原理】

　　游離狀態(tài)的考馬斯亮藍(lán)G250 在酸性溶液中呈紅褐色，與蛋白質(zhì)結(jié)合后呈藍(lán)色，蛋白質(zhì)含量與顏色的深淺成正比，經(jīng)595nm 測定，可作出蛋白質(zhì)含量與吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度。

　　【器材】

　　1.可見光分光光度計(jì)

　　2.試管

　　【試劑】

　　1.0.9% NaCl

　　2.蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液(500μg/ml)：小牛血清白蛋白50mg加生理鹽水至100ml

　　3.考馬斯亮藍(lán)G250溶液：考馬斯亮藍(lán)G250 100mg加95%乙醇50ml,加85%(W/V)H3PO4 100ml加蒸餾水至1000ml，置棕色瓶過夜，用雙層濾紙過濾。

　　【操作步驟】

　　(一)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)曲線的繪制

　　1.取小試管7支，按下表操作

　　2.混勻后靜置5min ，以1號(hào)為空白，595nm比色。

　　3.結(jié)果處理：以各管光密度為縱坐標(biāo)。各管所含蛋白質(zhì)量為橫坐標(biāo),制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　(二)蛋白質(zhì)含量測定

　　1.按下表操作

　　2.混勻靜置5min 后，以空白管調(diào)零，595nm 室溫比色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣品中蛋白質(zhì)含量。

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