(一)轉(zhuǎn)移印跡

　　1.轉(zhuǎn)移前準備：將濾紙，硝酸纖維素膜(NC)剪成與膠同樣大小，NC 膜浸入蒸餾水中10-20min 后浸入轉(zhuǎn)移buffer 中平衡30min 。

　　2.凝膠平衡：將電泳后的SDS-PAGE膠板置于轉(zhuǎn)移buffer 中平衡30-60min。

　　3.按圖操作：逐層鋪平，各層之間勿留有氣泡和皺折。

　　4.開始轉(zhuǎn)移，連接正負極，蓋好蓋子，接上電源，恒流0.8mA/cm，室溫下轉(zhuǎn)移1h，轉(zhuǎn)移后的凝膠再用氨基黑10B染色液染色20min ，然后脫色檢測轉(zhuǎn)移效果。

　　(二)免疫染色

　　1.轉(zhuǎn)移后的NC膜于5%脫脂奶粉中封閉，4℃過夜。

　　2.TBS洗膜1-2次，10min/次。

　　3.加HRP標記的抗體，室溫1h 。

　　4.TBS洗3次，10min/次。

　　5.NC膜再轉(zhuǎn)入DAB顯色液中，置暗處反應，待顯色反應達到最佳程度時，立即用三蒸水洗滌終止反應。

　　上海創(chuàng)賽科技性能卓越，白介素細胞因子，胎牛血清，電泳設(shè)備科學儀器，原料藥標準品，化學試劑，細胞培養(yǎng)耗材，上海創(chuàng)賽，海量產(chǎn)品特價促銷中，歡迎來電咨詢!