【基本原理】
真核生物的DNA主要存在于細胞核內(nèi)，以雙鏈線性高分子形式存在。DNA提取的主要過程是：破碎組織和細胞，去除與核酸結合的蛋白質(zhì)及其它多糖、脂類等生物大分子，本實驗通過蛋白酶K 和SDS 使蛋白質(zhì)變性，再用酚/氯仿除去蛋白質(zhì)，用乙醇使DNA 沉淀，經(jīng)A260/A280檢測DNA含量，再經(jīng)瓊脂糖電泳鑒定。
【器材】
1.玻璃勻漿器
2.臺式離心機
【試劑】
1.DNA提取緩沖液：
10mmol/L Tris-Cl (pH8.0)
0.1mol/L EDTA (pH 8.0)
20μg/ml 胰RNA酶
0.5% SDS
2.蛋白酶K 20mg/ml
3.飽和酚
4.NaAC(pH5.2)3 mol/L
5.1×TE(pH8.0)
6.100%乙醇
7.70%乙醇
【操作步驟】
1.取新鮮肝組織0.2g，加1.2ml DNA提取緩沖液制成勻漿，勿使細胞核破碎。
2.加6μl RNase(20mg/ml)，倒入Ep 管中，37℃水浴保溫30min，然入加6μl蛋白酶K(終濃度50μg/ml)，50℃保溫2h。
3.取0.5ml 保溫液，加0.5ml 飽和酚，充分振蕩混勻，于10 000rpm離心10 min，將上層水相轉(zhuǎn)入Ep 管中，加等體積氯仿/異戊醇(24:1)，充分混勻后，10 000rpm 離心10min。
4.上層水相轉(zhuǎn)移至Ep管中，加50μl 3mol/L NaAc，加2-2.5倍體積的無水乙醇，離心同上。
5.小心棄出上清，沉淀加70%乙醇離心洗滌一次，保留沉淀，使之自然干燥，加適量的水或TE溶解。
6.進行核酸定量測定和電泳鑒定。
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