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第八屆圖書館論壇 校體購2

人外周血白細(xì)胞DNA的制備

教育裝備采購網(wǎng) 2017-02-21 10:24 圍觀703次

  【基本原理】

  從全血中制備白細(xì)胞DNA,可用水直接破裂血中紅細(xì)胞和白細(xì)胞的細(xì)胞膜及核膜,釋出血紅蛋白、細(xì)胞核;再用KI 裂解細(xì)胞核并溶解DNA;最后用酚/氯仿除去蛋白質(zhì),加無水乙醇使DNA沉淀,經(jīng)A260/A280檢測DNA含量,再經(jīng)瓊脂糖電泳鑒定。

  【器材】

  1.離心機(jī)

  2.紫外分光光度計(jì)

  【試劑】

  1.5mmol/L KI:8.3g KI加H2O到10ml

  2.0.9% NaCl

  3. 氯仿/異戊醇(24:1)

  【操作步驟】

  1.取200μl抗凝血,加入1ml 水。

  2.8000rpm離心5min,棄上清。

  3.沉淀中加入40μl 5mol /L KI,旋渦振蕩30Sec。

  4.加入200μl 0.9% NaCl,然后再加入300μl氯仿/異戊醇,振蕩30Sec。

  5.10 000rpm離心5min。

  6.小心吸取上清液,加入冷無水乙醇1ml。

  7.10 000rpm離心5min,棄無水乙醇。

  8.DNA 樣品自然干燥。

  9.加適量的H2O或TE溶解DNA。

  10.核酸定量測定和電泳鑒定。

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