【基本原理】
核酸分子中含有堿基使核酸在260nm 下有最大吸收。紫外吸收是嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵系統(tǒng)所具有的性質(zhì)，含有嘌呤和嘧啶的物質(zhì)，不論是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。
蛋白質(zhì)由于含芳香族氨基酸，因此也能吸收紫外光，通常蛋白質(zhì)在280nm 波長有特異吸收。因此核酸在A260 及A260、A280 測定的比值(A260/A280)可以反映樣品中核酸的含量及純度。RNA在A260/A280的比值在2.0 以上;DNA在A260/A280的比為1.8左右。當樣品中蛋白質(zhì)含量較高時比值即下降。
【器材】
1.紫外分光光度計
2.紫外燈或凝膠成像儀
【試劑】
1.雙蒸水
2.DNA樣品或RNA樣品
【操作步驟】
1.將樣品加適量水或TE稀釋。
2.用1ml 水(或TE)做空白調(diào)零。
3.把樣品杯放入分光光度計比色槽中。
4.測A260吸光值，計算出樣品DNA或RNA含量。
5.如檢測樣品純度，還要再測A280 值，并計算二者比例，若比例為1.6 左右，說明有蛋白質(zhì)或其他吸收此波長的雜質(zhì)在其中，建議再用酚/氯仿抽提，繼以乙醇沉淀以除去雜質(zhì)。
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