1原理及用途

　　本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)谷物、飼料、食用油、啤酒、醬油等樣本中的玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）（又稱F-2毒素），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液，樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗玉米赤霉烯酮抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含玉米赤霉烯酮含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中玉米赤霉烯酮的殘留量。

　　2.技術(shù)指標(biāo)

　　2.1試劑盒靈敏度：0.3ppb(ng/ml)

　　2.2反應(yīng)模式：25℃，30min～15min

　　2.3檢測(cè)下限：

　　谷物及配合飼料…………………6ppb

　　2.4交叉反應(yīng)率：

　　玉米赤霉烯酮……………………100%

　　玉米赤霉酮………………………13%

　　玉米赤霉醇………………………＜1%

　　2.5樣本回收率：

　　谷物及配合飼料…………………90%±15%

　　3.試劑盒組成

　　酶標(biāo)板……………………………96孔

　　標(biāo)準(zhǔn)液（黑蓋）：各1ml

　　0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb

　　高標(biāo)準(zhǔn)液：1ppm……………………1ml

　　酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………5.5ml

　　抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml

　　底物液A（白蓋）……………………6ml

　　底物液B（黑蓋）……………………6ml

　　終止液（黃蓋）………………………6ml

　　20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

　　說(shuō)明書………………………………1份

　　4.需要的器材和試劑

　　4.1儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）

　　4.2微量移液器：?jiǎn)蔚?0μl-200μl，100μl-1000μl、多道300μl

　　4.3試劑：乙腈、正己烷、三氯甲烷或二氯甲烷

　　5.樣本前處理

　　5.1樣本處理前須知：

　　實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　　5.2配液：

　　配液1：樣本提取液

　　90%乙腈，即V乙腈:V去離子水=V9：V1。

　　5.3樣本前處理步驟：

　　5.3.1谷物（大米、玉米、小米等低脂含量）及配合飼料

　　處理方法

　　1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加8ml樣本提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

　　2）取0.5ml上清，加入2ml去離子水，混勻；

　　3）取50μl進(jìn)行分析。

　　稀釋倍數(shù)：20檢測(cè)下限：6ppb

　　6.酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

　　將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上,洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

　　實(shí)驗(yàn)開始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

　　6.1編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

　　6.2加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。

　　6.3洗滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

　　6.4顯色：每孔加入底物液A50μl，再加底物液B50μl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。

　　6.5終止：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

　　6.6測(cè)吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

　　7.結(jié)果分析

　　7.1百分吸光率的計(jì)算

　　標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

　　A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

　　A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

　　7.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。

　　若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索?。?/p>

　　8.注意事項(xiàng)

　　8.1室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

　　8.2在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

　　8.3混合要均勻，洗板要徹底，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。

　　8.4在所有孵育過(guò)程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

　　8.5不要使用過(guò)了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

　　8.6顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

　　8.7反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。

　　9.貯藏及保存期

　　儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2-8℃保存，避免冷凍。

　　保質(zhì)期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見包裝盒。