RORγ1 表達(dá)于多種組織，包括肝臟、脂肪、骨骼肌和腎臟。RORγt 主要表達(dá)于免疫系統(tǒng)的一些不同類型細(xì)胞，是促進(jìn) Th17 細(xì)胞分化并產(chǎn)生關(guān)鍵因子 IL-17，在自身免疫疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。目前，RORγt 被認(rèn)為是抗自身免疫疾病，特別是銀屑病藥物研發(fā)的新靶點(diǎn)，RORγt 小分子抑制劑近幾年已成為學(xué)術(shù)界乃至國際制藥公司研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域，極具開發(fā)潛力。

　　近期，瑞士諾華生物醫(yī)學(xué)研究中心運(yùn)用基于片段的藥物篩選和設(shè)計(jì)策略，發(fā)現(xiàn)了新型高活性 RORγt 小分子反向激動劑。其中具有代表性的化合物 9活性較好，其體外活性數(shù)據(jù)如圖 1 所示。

　　圖1. 化合物 9的結(jié)構(gòu)及體外活性數(shù)據(jù)（圖片來源：J. Med. Chem.）

首先，研究者針對 RORγt 蛋白采用傳統(tǒng)的計(jì)算機(jī)虛擬篩選辦法從化合物片段庫中進(jìn)行篩選。為了獲得小分子片段在靶蛋白中的結(jié)合模式，研究者將挑選的片段進(jìn)行共晶復(fù)合物的培養(yǎng)。在獲得的 13 個共晶復(fù)合物中，化合物 1 采用質(zhì)譜親和力測定實(shí)驗(yàn)所得的 IC₅₀ 為 216 μM，晶體復(fù)合物結(jié)構(gòu)顯示其可以與靶蛋白中的 F377、H323、Q286 形成重要的氫鍵作用，此外，化合物 1 中的苯環(huán)可以與F378的苯環(huán)形成邊-面相互作用。氯原子可以與C320的側(cè)鏈形成疏水作用。（圖2）在此基礎(chǔ)上，以化合物 1 作為起始分子，利用薛定諤軟件中的 SiteMap工具進(jìn)行周圍活性位點(diǎn)的預(yù)測，通過“片段生長”的策略獲得化合物

　　。

圖2. 化合物 1、RIP140 肽與 RORγt 蛋白（Y264-K518）的共晶復(fù)合物（PDB ID: 6FZU）；（圖片來源：J. Med. Chem.）

圖3. 基于片段的藥物設(shè)計(jì)（圖片來源：J. Med. Chem.）

　　隨后，對化合物 9 進(jìn)行體外藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究，結(jié)果如圖 4 所示。由于化合物 9 在中性條件下具有較高的親脂性和低水溶性，其 LogD（7.4）>5.7。Caco2 和 PAMPA 實(shí)驗(yàn)表明化合物具有較好的透膜性。體外肝微粒體實(shí)驗(yàn)表明，化合物的清除率低，代謝穩(wěn)定性好。除此之外，化合物與血漿蛋白具有很高的結(jié)合率（>99%）（圖4）。Sprague−Dawley 大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，化合物 9在 1 mg/kg 注射條件下，T_1/2 為 1.3 h，血漿清除率為 76 mL/min/kg；3 mg/kg口服給藥時，T_max 為 2.7 h，口服生物利用度為 10%。

圖4. 體外藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)（圖片來源：J. Med. Chem.）

　　小M 的小思考：

　　近年來，免疫治療進(jìn)入了一個快速發(fā)展的時代，尤其是免疫檢驗(yàn)點(diǎn)抑制劑在臨床上取得了一定的療效，并展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景^[1-2]。具有代表性的是多個上市的腫瘤免疫藥物，如 PD1/PDL1 單抗、CTLA-4 單抗以及處于臨床試驗(yàn)階段的 CAR-T 細(xì)胞療法。臨床數(shù)據(jù)顯示，這些療法的聯(lián)用或者它們與分子靶向藥物聯(lián)合用藥能夠提高臨床應(yīng)答率并克服腫瘤的耐藥問題^[3-4]。但是，它們同時也存在著很多問題，比如并非所有的腫瘤類型都對免疫治療響應(yīng)或者患者的響應(yīng)率比較低，CAR-T 細(xì)胞療法也只在血液腫瘤中顯示驚人的療效，未來還需要研究人員不斷的探索。

　　RORγt 作為一種與自身免疫性疾病密切相關(guān)的靶點(diǎn)，其能夠促進(jìn) Th17 細(xì)胞分化并產(chǎn)生關(guān)鍵因子 IL-17，被認(rèn)為是抗自身免疫疾病，特別是銀屑病藥物研發(fā)的新靶點(diǎn)。本文采用計(jì)算機(jī)虛擬篩選的策略和基于片段的藥物設(shè)計(jì)策略，發(fā)現(xiàn)了高活性 RORγt 反向激動劑，并闡明其作用機(jī)制，為開發(fā)抗銀屑病藥物提供了重要的參考。

　　參考文獻(xiàn)

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　　[2]Sadelain, M. et al. Therapeutic Tcell engineering. Nature 2017, 545, 423−431.

　　[3]Garon, E. B. et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-celllung cancer. N. Engl. J. Med. 2015,372,2018–2028.

　　[4]Larkin, J. et al. Combinednivolumab and ipilimumab or monotherapy in untreated melanoma. N. Engl. J.Med. 2015, 373, 23–34.

　　[5] Carcache,D. A. et al.Optimizing a WeaklyBinding Fragment into a Potent RORγt Inverse Agonist with Efficacy in an inVivo Inflammation Model.JMed Chem. 2018 doi: 10.1021/acs.jmedchem.8b00529.

　　相關(guān)產(chǎn)品

　　RORγ-IN-1

　　RORγ-IN-1 是一個 RORγ 抑制劑來自專利 US 9481674 B1。Ki 值為 <100 nM。

　　GSK2981278

　　GSK2981278 是一種維甲酸相關(guān)孤兒受體 γ（RORγ）調(diào)節(jié)劑, 詳細(xì)信息請參考專利文獻(xiàn) WO /2015061515 A1。

　　ROR γ-t-IN-1

　　RORγt-IN-1是一種有效的 RORγt 抑制劑。

　　LYC-55716

　　LYC-55716是一種新型口服有效的 RAR 相關(guān)孤兒受體γ (RORγ) 激動劑。

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　　天然產(chǎn)物：

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