真菌，是一種真核生物。最常見(jiàn)的真菌是各類蕈類，另外真菌也包括霉菌和酵母?，F(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了七萬(wàn)多種真菌，估計(jì)只是所有存在的一小半。大多真菌原先被分入動(dòng)物或植物，現(xiàn)在成為自己的界，分為四門。真菌自成一門，和植物、動(dòng)物和細(xì)菌相區(qū)別。真菌和其他三種生物最大的不同之處在于，真菌的細(xì)胞有含甲殼素(又叫幾丁質(zhì)、甲殼素、殼多糖)為主要成分的細(xì)胞壁，和植物的細(xì)胞壁主要是由纖維素組成的不同。

　　無(wú)性繁殖(asexual reproduction)是指營(yíng)養(yǎng)體不經(jīng)過(guò)核配和減數(shù)分裂產(chǎn)生后代個(gè)體的繁殖。它的基本特征是營(yíng)養(yǎng)繁殖通常直接由菌絲分化產(chǎn)生無(wú)性孢子。

　　真菌并沒(méi)有整條的性染色體，只有一些DNA片段起著相同的作用。真菌生長(zhǎng)發(fā)育到一定時(shí)期(一般到后期)就進(jìn)行有性生殖(sexualre production)。有性生殖是經(jīng)過(guò)兩個(gè)性細(xì)胞結(jié)合后細(xì)胞核產(chǎn)生減數(shù)分裂產(chǎn)生孢子的繁殖方式。多數(shù)真菌由菌絲分化產(chǎn)生性器官即配子囊(gametangium)，通過(guò)雌、雄配子囊結(jié)合形成有性孢子。其整個(gè)過(guò)程可分為質(zhì)配(plasmogamy)、核配(karyogamy)和減數(shù)分裂(meiosis)三個(gè)階段。

　　真菌DNA的提取方法：

　　(一)

　　1.取真菌菌絲0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉

　　2.加入4mL提取液，快速振蕩混勻

　　3.加入等體積的4mL的氯仿:異戊醇(24:1)，渦旋3～5min(此處是粗提沒(méi)有加酚，可以節(jié)約成本的喲!)

　　4.1000rpm，4℃，5min，上海創(chuàng)賽提供異戊醇，3-Methyl-1-butanol ，GCS，≥99.8% (GC)，123-51-3，商品編號(hào)：C16-M11211-5ml，價(jià)格85元。

　　5.上清用體積的氯仿:異戊醇(24:1)再抽提一次(10,000 rpm，4℃離心5 min)

　　6.取上清，加入2/3倍體積的-20℃預(yù)冷異丙醇或2.5倍體積的無(wú)水乙醇沉淀, 混勻, 靜置約30 min

　　7.用毛細(xì)玻棒挑出絮狀沉淀, 用75%乙醇反復(fù)漂洗數(shù)次, 再用無(wú)水乙醇漂洗1次, 吹干，重懸于500 ?ulTE中

　　8.加入1 ul RNaseA (10 mg/mL)，37℃處理1 hr

　　9.用酚(pH8.0):氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次(10,000 rpm，4℃離心5 min)

　　10.取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V體積的無(wú)水乙醇, -70℃沉淀30 min以上

　　11.沉淀用75%乙醇漂洗，風(fēng)干, 溶于200 ulTE中，-20 ℃保存?zhèn)溆?/p>

　　DNA提取液：0.2M Tris-HCl(pH 7.5)，0.5M NaCl，0.01M EDTA，1%SDS，3M NaAc，上海創(chuàng)賽提供三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽,>99.5 (滴定)，1185-53-1，商品編號(hào)：B11000465-100g，價(jià)格94.5元。

　　(二)

　　1.真菌菌絲0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉

　　2.加入3 mL 65℃預(yù)熱的DNA提取緩沖液，快速振蕩混勻65℃水浴30 min, 期間混勻2-3次

　　3.加入1 mL 5M KAc，冰浴20 min

　　4.等體積的氯仿:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000 rpm，4℃離心5 min)，上海創(chuàng)賽提供氘代氯仿,99.8 atom%D[氘代試劑]，865-49-6，商品編號(hào)：C52-H50480-100ml，價(jià)格290元。

　　5.取上清，加入2/3倍體積的-20℃預(yù)冷異丙醇, 混勻, 靜置約30 min

　　6.用毛細(xì)玻棒挑出絮狀沉淀, 用75%乙醇反復(fù)漂洗數(shù)次, 再用無(wú)水乙醇漂洗1次, 吹干，重懸于500 ?L TE中

　　7.加入1 ul RNaseA (10 mg/mL)，37℃處理1 hr

　　8.用酚(pH8.0):氯仿:異戊醇(25:24:1)和氯仿:異戊醇(24:1)各抽提1次(10,000 rpm，4℃離心5 min)

　　9.取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V體積的無(wú)水乙醇, -70℃沉淀30 min以上

　　10.沉淀用75%乙醇漂洗，風(fēng)干, 溶于200 ul TE中，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

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