細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。

　　細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費，而且細(xì)胞一旦離開活體開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要。細(xì)胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細(xì)胞儲存在液氮中，溫度達(dá)-196℃，理論上儲存時間是無限的。

　　細(xì)胞的凍存

　　1. 為了保證細(xì)胞良好的狀態(tài)，在細(xì)胞凍存的前一天使細(xì)胞處于對數(shù)增長期，同時將細(xì)胞換液，次日，按照細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法，用胰酶消化貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞用培養(yǎng)基沖下來，然后，用50 mL尖底離心管離心，1000 rpm，4min，棄上清，收集細(xì)胞。

　　2. 加入適量的凍存液(10% DMSO 和 90%含有20%血清的IMDM培養(yǎng)基)上海創(chuàng)賽科技提供MRS肉湯液體培養(yǎng)基 ,商品編號：C010384-1-250g，價格280元。

　　3. 分裝到凍存管中，做好標(biāo)記，標(biāo)明細(xì)胞名稱，保存時間，所用培養(yǎng)基等。上海創(chuàng)賽科技提供細(xì)胞凍存管，F(xiàn)reezing Tubes，商品編號：C81-FCT002005-0.5ml，5000支/箱，價格3272元。

　　4. 4℃放置30 min;-20℃放置1.5 h; -70℃放置12 h;最后移到液氮罐中。

　　細(xì)胞的復(fù)蘇

　　細(xì)胞的復(fù)蘇原則是快速溶化，因為如果緩慢的溶化，會使進(jìn)入細(xì)胞的水分形成冰晶，對細(xì)胞造成傷害，因此，在復(fù)蘇細(xì)胞時，將凍存細(xì)胞直接放到37℃的水浴中，使其迅速溶解。在超凈臺內(nèi)將凍存管內(nèi)的細(xì)胞懸浮液直接倒入小培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)，然后，加入3 mL的培養(yǎng)液。次日，觀察細(xì)胞生長情況，并更換細(xì)胞培養(yǎng)液。

　　細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。

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