一個合格質(zhì)粒的組成要素包括：

　　1. 復(fù)制起始位點Ori 即控制復(fù)制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復(fù)制起始點。而真核生物DNA分子有多個復(fù)制起始位點。

　　2. 抗生素抗性基因 可以便于加以檢測，如Amp ,Kan

　　3. 多克隆位點MCS 克隆攜帶外源基因片段

　　4. P/E 啟動子/增強子

　　5. Terms 終止信號

　　6. 加poly(A)信號 可以起到穩(wěn)定mRNA作用如何閱讀質(zhì)粒圖譜

　　第一步:首先看Ori的位置

　　了解質(zhì)粒的類型(原核/真核/穿梭質(zhì)粒) 所謂穿梭質(zhì)粒是指一類人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點和選擇標(biāo)記，因而可以在兩種不同類群宿主中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。此概念不僅用于不同的微生物菌群之間，也可以推廣到真核生物表達載體的構(gòu)建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動物表達載體pMT2 和用于植物細胞的Ti 質(zhì)粒。這些穿梭質(zhì)粒不僅可以在大腸桿菌中復(fù)制擴增，也可以在相應(yīng)的枯草、酵母、動物或植物細胞中擴增和表達。這樣利于對質(zhì)粒的分子生物學(xué)操作和大量制備。

　　第二步:再看篩選標(biāo)記

　　如抗性，決定使用什么篩選標(biāo)記。

　　1. Ampr 水解β-內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。 上海創(chuàng)賽科技提供氨芐西林/氨芐青霉素，>980 mcg/mg,USP,BR,可用于細胞培養(yǎng)，商品編號：C84-1507-5G，價格78元。

　　2. tetr 可以阻止四環(huán)素進入細胞。 上海創(chuàng)賽科技提供鹽酸四環(huán)素，≥900μg/mg,USP32,BR，64-75-5，商品編號：C84-2004-10G，價格108元。

　　3. camr 生成氯霉素羥乙?；苌铮怪ザ拘?。

　　4. neor(kanr) 氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使G418(長那霉素衍生物)失活

　　5. hygr 使潮霉素β失活。 上海創(chuàng)賽科技提供潮霉素B,>90%,粉末,進分，31282-04-9，商品編號：C84-6158-100MG，價格200元。

　　第三步:看多克隆位點(MCS)

　　它具有多個限制酶的單一切點。便于外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入，會導(dǎo)致某種標(biāo)志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。

　　第四步:再看外源DNA插入片段大小

　　質(zhì)粒一般只能容納小于10Kb的外源DNA片段。一般來說，外源DNA片段越長，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。

　　第五步:是否含有表達系統(tǒng)元件

　　即啟動子-核糖體結(jié)合位點-克隆位點-轉(zhuǎn)錄終止信號。這是用來區(qū)別克隆載體與表達載體?？寺≥d體中加入一些與表達調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達載體。選用那種載體，還是要以實驗?zāi)康臑闇?zhǔn)繩。啟動子-核糖體結(jié)合位點-克隆位點-轉(zhuǎn)錄終止信號 。

　　1. 啟動子：促進DNA轉(zhuǎn)錄的DNA順序，這個DNA區(qū)域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是DNA分子上可以與RNApol特異性結(jié)合并使之開始轉(zhuǎn)錄的部位，但啟動子本身不被轉(zhuǎn)錄。

　　2. 增強子/沉默子：為真核基因組(包括真核病毒基因組)中的一種具有增強鄰近基因轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控順序。其作用與增強子所在的位置或方向無關(guān)。即在所調(diào)控基因上游或下游均可發(fā)揮作用。沉默子-負增強子，負調(diào)控序列。

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