原理不同：熒光定量PCR實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光;普通pcr通過(guò)檢測(cè)插入dna中熒光染色劑來(lái)看是否有目的片段。

　　應(yīng)要求：熒光定量對(duì)擴(kuò)增片段有較高的要求，一般為100-300bp;普通PCR可以擴(kuò)增長(zhǎng)點(diǎn)的片段。熒光定量可以不進(jìn)行電泳就對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定量分析，普通PCR必須電泳。

　　結(jié)果：熒光定量可以實(shí)現(xiàn)精確定量，普通PCR則不行。熒光定量體現(xiàn)可以看到整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程，可以看到擴(kuò)增效率，溶解溫度，直接得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線等，這些是普通PCR無(wú)法實(shí)現(xiàn)的

　　RT-PCR有兩種：實(shí)時(shí)熒光定量PCR (Real-Time PCR)和反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse Transcription PCR)，都屬于Q-PCR (Quantitative PCR, 定量PCR)，以RNA或cDNA為模板，以cDNA序列設(shè)計(jì)引物，測(cè)量RNA水平的表達(dá)。

　　熒光定量PCR，加熒光，必需在定量PCR上做，一般片段較短(80-120bp)，有固定程序，可以根據(jù)對(duì)照精確計(jì)算不同樣品間的表達(dá)差異。

　　反轉(zhuǎn)錄PCR，不加熒光，一般的PCR儀即可，循環(huán)數(shù)在15-25之間，片段可選120-500bp，表達(dá)差異可以由跑電泳膠顯示。

　　Real-time PCR通常用的方法是SYBR Green，這種方法引物在RT-PCR的基礎(chǔ)上需要注意：

　　1.退火溫度同內(nèi)參;

　　2.片段長(zhǎng)度不要超過(guò)200;

　　real-time PCR的引物可以跑RT-PCR，反之不一定。

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